Reacción en Cadena de la Polimerasa

Reacción en cadena de la ADN Polimerasa

INTRODUCCION
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica para la síntesis "in vitro" de
secuencias específicas de ADN. Es una forma simple y muy rápida de multiplicar el ADN presente
en diferentes muestras biológicas, obteniéndose millones de copias de una determinada secuencia
de ADN.
Las siglas PCR significan "Polimerase ChainReaction", Reacción en Cadena de la Polimerasa.
La PCR es una técnica ampliamente usada en laboratorios de investigación y tiene muchas
aplicaciones en campos entre los que se incluyen las enfermedades infecciosas, la arqueología, el
control de alimentos, la genética humana, la terapia del cáncer y la evolución molecular entre
muchos otros.
En cuanto a aplicaciones clínicas, la PCR se utilizapara identificar los agentes infecciosos como el
bacilo de la tuberculosis y otras bacterias, el VIH y otros virus.

HISTORIA
Cualquier descubrimiento científico contemporáneo se remonta atrás en el tiempo, tanto que sería
difícil concretar cuando empieza una línea de investigación, en este caso me remonto a la primera
publicación sobre la enzimología de la replicación de ADN, hecha por ArthurKornberg y sus
colaboradores en 1957.
Estos investigadores aislaron una enzima de E. coli que podía dirigir la síntesis de ADN en un
sistema exento de células (in vitro), es la que actualmente se conoce como ADN-Polimerasa I.
Posteriormente, en 1969 Peter DeLucia y John Cairns publicaron el descubrimiento de una cepa de
E. coli que era deficiente para la actividad de la ADN-Polimerasa I, yque esta misma cepa en
ausencia de esta enzima también era capaz de duplicar su ADN y se reproducía con éxito, esto llevó
a la conclusión de que debía haber más enzimas responsable de la duplicación del ADN in vivo, en
la actualidad se han aislado dos polimerasas mas, conocidas como ADN-Polimerasa II y ADNPolimerasa III.
Las técnicas de ADN recombinante se desarrollan a principios de la décadade los 70, y en los años
posteriores revolucionaron la manera en que los genéticos y los biólogos moleculares dirigían las
investigaciones.
Finalmente en 1986 Kary Mullis desarrolló una nueva técnica denominada reacción en cadena de la
polimerasa (PCR), que ha ampliado enormemente el poder de la investigación del ADN
recombinante.

Reacción en cadena de la ADN Polimerasa

MATERIAL YMETODO
La reacción es muy sencilla, sólo se precisa un tubo de ensayo, algunos reactivos, un
termociclador, el ADN sustrato y un par de oligonucleótidos específicos para la secuencia que se
desea obtener y que actúan como cebadores . La reacción se lleva a cabo en una serie de ciclos,
generalmente 30, en cada uno de los cuales se produce un incremento exponencial del número de
moléculas obtenidascomo producto debido a que los fragmentos generados actúan como sustrato en
los ciclos subsecuentes.

Aparatos:
Como se acaba de explicar la reacción en cadena de la polimerasa se realiza en tres etapas que
constituyen un ciclo, que se repite durante un número determinado de veces. El tiempo, la
temperatura y el número de ciclos son factores determinantes en los resultados de la PCR, por lotanto modificándolos podemos optimizar la reacción.
Las primeras reacciones se realizaban manualmente cambiando continuamente los tubos de un baño
María a otro de diferente temperatura (la Tª de desnaturalización, la de hibridación y la de
elongación). El proceso resultaba demasiado tedioso y era difícil alcanzar las temperaturas y los
tiempos correctos, por lo que se desarrolló eltermociclador que lo hacía de manera automática.
Termociclador:
Es el aparato que va a mantener la temperatura necesaria en cada una de las etapas que conforman
un ciclo.
El termociclador se puede sintetizar en cuatro Bloques principales: Calentamiento/enfriamiento, de
potencia, de control e interfase usuario equipo.
El equipo posee un bloque portatubos que contiene las muestras con material...