REACCIÓN DE LA PEROXIDASA Y DE LA POLIFENOL OXIDASA

UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD




REPORTE PRÁCTICA 3: REACCIÓN DE LA PEROXIDASA Y DE LA POLIFENOL OXIDASA.


MATERIA: BIOQUÍMICA II LABORATORIO.



PROFESORA: MARIBEL PLASCENCIA



INTEGRANTES DEL EQUIPO:
ROCÍO AYALA ROMERO
SAMANTHA LÓPEZ PERALTA
MARÍA FERNANDA TORRES RUIZ


NÚMERO DE EQUIPO: 1


GRUPO: 4, PARTICIÓN 1HERMOSILLO, SONORA A 15 DE OCTUBRE DE 2012
INTRODUCCIÓN
La enzima peroxidasa E.C.1.11.1.7 cataliza la oxidación de algunos compuestos donadores de hidrógeno, como fenoles (pirogalol, guayacol) y aminas aromáticas (o- fenilendiamina) por medio de peróxidos. El guayacol es el substrato oxidable más utilizado, éste es oxidado a un complejo coloreado de tetraguayacol en presencia de peroxidasa.
Laperoxidasa presenta un grupo Hemo (grupo prostético), cuyo átomo central de hierro forma complejos con diferentes compuestos, como los cianuros y la hidroxilamina, inhibiéndose su actividad enzimática.
La actividad enzimática depende del vegetal, del substrato oxidable que se utiliza como reactivo, del pH y temperatura a la que ocurre la reacción. En los animales la función principal de éstasenzimas es defensiva y se encuentran principalmente en la saliva, la leche o los leucocitos, donde se aprovecha el carácter oxidante con fines germicidas y bactericidas del peróxido que se genera de forma endógena mediante otras reacciones (glucosa oxidasa, amino ácido oxidasa etc.).
Esta enzima puede ser inactivada por el calor, requiere mayor temperatura y más tiempo para su inactivación. Posee lapropiedad de la regeneración enzimática, fenómeno que consiste en que, al inhibirla por medio del calor después de un tiempo determinado, recupera parcialmente su actividad. Esto ocurre porque la fracción proteica de la enzima sufre una desnaturalización parcial con pérdida de su estructura terciaria; si el calor se aplica un tiempo muy corto, se produce una reversión de la proteína a su estadonormal por recombinación de sus grupos hidrógenos o sulfhidrílicos.
La enzima polifenol oxidasa EC 1.14.18.1 (PPO) se encuentra principalmente en plantas y hongos. Ésta cataliza una reacción que transforma o-difenoles en o-quinonas. Las o-quinonas son muy reactivas y atacan a una gran variedad de componentes celulares, favoreciendo la formación de polímeros negro-marrón (responsables deloscurecimiento de tejidos vegetales cuando se dañan físicamente).
Cuando la célula se encuentra sana e intacta, las PPOs y sus sustratos, los fenoles, se encuentran en compartimientos separados (cloroplastos y vacuolas, respectivamente). Las enzimas y sustratos se juntan, llevándose a cabo la reacción anteriormente descrita, cuando la célula se desorganiza al envejecer, o como resultado de daño físico oinfeccioso. El oscurecimiento producido por las PPOs causa grandes pérdidas a la industria agropecuaria, por esta razón para determinar la calidad de frutas y verduras es importante conocer el contenido de polifenol oxidasas y su nivel de actividad enzimática.

OBJETIVO
Conocer qué es un extracto libre de células y cómo se pueden probar actividades enzimáticas, en especial determinar laactividad enzimática de la peroxidasa y la polifenol oxidasa, obtenidos a partir de un extracto libre de células (extracto crudo) de la papa.

MATERIAL
1 gradilla
15 tubos de ensaye de 13 x 100 mm
2 vasos de precipitado de 250 ml
1 mortero
1 bandeja para hielo
1 varilla agitador
1 pipeta de 5 ml
3 pipetas de 1 ml
1 pinza para tubos de ensaye
1 mechero
1 tripié
1 tela de asbestoRESULTADOS Y OBSERVACIONES
TUBO
OBSERVACIÓN AL INSTANTE
2’
5’
10’
15’
1
0.5 ml catecol 1%
5 ml extracto frio
Amarillo
Color café claro
Color entre café claro y rosa. Formación de capa superior
Difuminación de capa superior
S/C
2
0.5 ml catecol 1%
0.5 ml H2O2 3%
5 ml extracto frio
Se torna color guinda oscuro rápidamente
Color guinda oscuro....