Receta Tampones

1. Tampón para el gel separador Tris-HCl 1,5 M, pH 8,8.
13Solución tampón Tris –HCl 1,5 M pH 8,8
100 mililitros
Tris-base 18,17 g
Disolver en 80ml de agua destilada
Ajustar el pH a8,8 con HCl concentrado
Agua destilada Añadir hasta 100 ml
1.2. Tampón para el gel concentrador Tris-HCl 0,5M, pH 6,8.
Solución tampón Tris –HCl 0,5 M pH 6,8
100 mililitros
Tris-base 6,05g
Disolver en 80ml de agua destilada
Ajustar el pH a 6,8 con HCl concentrado
Agua destilada Añadir hasta 100 ml
1.3. SDS al 10% (peso/volumen)
a
:
Solución SDS 10%
b
100mililitros
SDS 10 g
Disolver en 80 mL de agua destilada
Agua destilada Hasta 100 ml
a
El SDS precipita si la temperatura ambiente es inferior a 18ºC. Calentar
ligeramente para favorecer ladisolución.
b
El SDS se debe manipular siempre con guantes y mascarilla.
1.4. Persulfato amónico (APS) al 10%.
Solución APS 10%
a
10 mililitros
APS 10 g
Disolver en 8 mL de agua destiladaAgua destilada Hasta 10 ml
a
Una vez preparados los 10 mL se reparten en alícuotas de 1 ml en tubos
eppendorf y se conservan a -20ºC hasta su uso.
1.5. Gel separador al 13% deacrilamida en tampón Tris-H-Cl 0,375 M,
pH 8,8
Gel separador 13%
10 mililitros
a
(g)
Tris HCl 1,5M pH 8,8 2,5 ml
SDS 10% 0,1 ml
Acrilamida/bisacrilamida
30%
a
4,3 ml
APS 10 % 0,05ml
TEMED 0,005 ml
Agua destilada Hasta 10 ml
( aproximadamente 3 ml)
a
No pipetear nunca con la boca. La acrilamida es neurotóxica y
cancerígena, por lo que se manipulará siemprecon guantes y se usarán
gafas protectoras.
1.6. Gel concentrador al 3% de acrilamida en tampón Tris-H-Cl 0,125 M,
pH 6,8
14Gel separador 3%
10 mililitros
0,5M Tris HCl pH 6,8 2,5 mlSDS 10% 0,1 ml
Acrilamida/bisacrilamida
30%
a
1 ml
APS 10 % 0,100 ml
TEMED 0,005 ml
Agua destilada Hasta 10 ml
(aproximadamente 6,20 ml)
a
No pipetear nunca con la boca.