Recuento de celulas viables
Para determinar el número de células viables por ml, se realizan diluciones decimales seriadas y se siembran las diluciones adecuadas enun medio sólido. El principio se basa es que cada célula viable produce una colonia en el medio de cultivo (unidades formadoras de colonia (UFC/ml)). Las diluciones que sehan de sembrar son aquéllas en las que la recuperación de colonias en placa será entre 30 y 300. Los medios de cultivo utilizados pueden ser:
Genéricos: Crecen todos losmicroorganismos presentes en la muestra. Ex: Medio YEPD, medio rico donde crecen tanto levaduras como bacterias
Selectivos: Se selecciona algún tipo de microorganismo,inhibiendo el crecimiento del resto. Ex: Medio YEPD con cloranfenicol, medio rico al cual se le adiciona un antibiótico que inhibe el crecimiento de bacterias.
Diferenciales:Medios donde se pueden diferenciar en la misma placa diferentes morfologías, coloraciones que nos permiten diferenciar las poblaciones de diferentes microorganismos. Ex:Medio WLN, permite diferenciar algunas especies de levaduras.
En esta práctica, utilizaremos 3 medios de cultivo:
Medio Genérico
Medio YEPD (Yeast Extracte PeptoneDextrose) agar
Glucosa 20 g
Peptona (Cultimed) 20 g
Extracto de levadura (Cultimed) 10 g
Agar (Tipus E, Cultimed) 20 g
Agua destilada c.s.p. 1 litro
MediosSelectivos
Medio YPD + Cloranfenicol (100 mg/l) (Selectivo para levaduras)
Medio YPD + Natamicina (100 mg/l) (Selectivo para bacterias)
Medio Agar lisina (selectivopara No-Saccharomyces)
Glucosa 20 g
Peptona 20 g
Extracto de levadura 10 g
Agar bacteriológico 20 g
Agua destilada c.s.p. 1 litro
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