Recuento En Placas

Universidad de Santiago de Chile
Facultad Tecnológica
Departamento de ciencias y tecnología de los alimentos
Tecnólogo en Alimentos
Técnica de recuento de microorganismos
Laboratorio n°5

Daisy Pajarito Bustamante
Josefa Yañez Araya
Santiago de Chile 23 de mayo del 2012
Introducción:
El análisis de un alimento, tipo ynúmero de microorganismo es esencial en la determinación para poder distinguir si existe algún tipo de contaminación. Una de las técnicas importantes en el estudio de microbiología es la técnica de recuento de microorganismos ya que la numeración de éstos entrega información de una muestra de alimento, como el origen, recepción, manejo, envasado, entre otros.
Existen varios métodos de recuento demicroorganismos totales, los nombraremos a continuación: Técnicas de recuento de células, recuento en placa, filtros de membrana, films secos microcolonias en DEFT, gotitas de agar, método del número más probable, métodos basados en la reducción de colorantes, tubos rodantes, recuento microscópico directo. Además de las técnicas de recuento basadas en la formación de colonias observables(biológicas).Llevaremos a la práctica 2 tipos de recuento de microorganismos:
Un recuento directo es un recuento de las células individuales de una población microbiana, se utiliza el microscopio óptico y un porta especial denominado cámara de recuento, la que se utiliza es la cámara de Neubauer.
.
Recuento en placa se utilizan los métodos de extensión o de vertido en placa, empleados para cultivar losmicroorganismos, la técnica consiste en diluir de manera seriada, una muestra del cultivo y luego sembrar una pequeña cantidad de cada dilución en una placa o bien mezclarla con el medio a sobrefusión.

Objetivos:

-Reconocer los distintos tipos de recuentos de microorganismos.
-Procedimiento microbiano de la calidad del alimento.
-Realizarun recuento en suspensión de levaduras, en base a la cámara de Naubauer.
-Recuento en placa de una muestra de alimento (arroz chaufán).

Materiales y muestras:
* 4 Pipetas y porta-pipeta -Caldo peptonado
* Cinta masking -Levaduras
* 4 Tubos de ensayo -Cubre objetos
*4 Placas petri -Cámara de Neubauer
* Stomacher (homogeníza) -Microscopio Óptico
* Mechero Bunzen -papel absorbente

Procedimiento

Recuento de una suspensión en levadura:
Se limpia el mesón con papel absorbente para
Preparar la cámara de Neubauer limpiar con
Aguapura y papel la superficie de la cámara y
El cubreobjetos, luego se extrae un pequeño
Volumen de la suspensión con la pipeta Pasteur
De vidrio seca y colocar la punta de la pipeta en
Ángulo contra el borde del cubreobjetos y la
Cámara e introducir la muestra por capilaridad
Hasta llenar la superficie bajo el cubreobjetos.
Llenar las dos superficies. Finalmente se debe observar enobjetivos 10x y 40x en el microscopio óptico y realizar el conteo de células observando la televisión del laboratorio, contar las células dispersas en el cuadrado central y los 4 de las esquina. Después del conteo lavar los materiales y guardar.

Resultados y cálculos:

Se contaron las células de el cuadro central y de los 4 de las
Esquinas los valores son los siguientes: 177, 175, 190, 155,156Se debe sacar un promedio de los 5 valores de recuento de los
Cuadros:
Primer cuadrante: 177
Segundo cuadrante: 175
Tercer cuadrante: 190 171 colonias.
Cuarto cuadrante: 155
Cuadrante central: 156
Se aplican los valores a la siguiente formula remplazando:

Número de células/ ml = N x 5 x FD x 10000
Número de células/ml = 171 x 5 x 102 x 10000...