Reporte Caseina

REPORTE LABORATORIO BIOQUIMICA

PROTEINAS: Extracción y cuantificación de la caseína de la leche

Parte I

Objetivos: Extracción y purificación de caseína, de una muestra de leche

Muestra de leche.
Responda y Discuta las siguientes preguntas. (Cada respuesta debe tener bibliografía).

a) Nombre los materiales que se ocuparán en este trabajo práctico. ¿Quéfunción cumple cada uno de ellos? [http://es.scribd.com/doc/17604744/Funcion-de-Materiales-de-Laboratorio]
- Vaso precipitado: se utiliza para contener las sustancias
- H2O(d) (Agua destilada): Se utilizo para resuspender la muestra en un principio
- Probeta: se utiliza para contener o medir volúmenes de liquidos de una forma aproximada.
- Leche descremada: sustancia que se ocupara para realizarel practico
- Pipeta graduada: sirve para dar volúmenes exactos ya que lleva una escala graduada.
- Tubo de ensayo: Contenedor de liquido
- Tubo de ensayo cono?
- NaOH (Hidróxido de sodio): reduce el agua de la muestra para asi interactuar con facilidad con las proteínas que esta posee.
- HCl (Acido clorhídrico) : se utilizo para neutralizar el pH de la leche
- Etanol: se utiliza paraseparar la interacción agua proteína que se presenta precipitando así estas últimas.
- pH-metro: Utilizado para medir la estabilización del pH de la leche en 4,6 para comenzar con el procedimiento.
- Maquina de centrifugación: pone en rotación una muestra para acelerar por fuerza centrífuga la decantación o sedimentación de sus componentes o fases
- Espectrofotómetro: es utilizado en ellaboratorios de química para la cuantificación de sustancias, microorganismos y concentración en las muestras
- Reactivo de BIURET: empleado para observar la concentración de proteína junto para la realización de la curva de calibración
- Pro pipeta con pipeta: Utilizada para la extracción de líquidos que fueron necesarios en el procedimiento.

b) Condiciones iniciales:
Mida el pH inicial de sumuestra de leche. ¿Qué reactivo debe añadir a la muestra para que su pH final sea 4,6?
pH (leche) inicial = __6.8__ llevar a pH (final) = 4,6.
Se le agregaron gotas de HCl a la solución hasta obtener un pH 4,6.

c) ¿Cuál es el fundamento químico que se tiene para la utilización del HCl? (buscar una bibliografía)
El HCl es un acido, y en las reacciones acido-base todos los ácidos al ceder unprotón reducen las bases conjugadas de dichos ácidos, es decir, que al agregar HCl a la leche (solución en la que se encuentra la caseína), el HCl produce un cambio de pH en la leche, alterando el estado iónico de la caseína, dejándola en estado de carga neutra (punto Isoeléctrico) donde la solubilidad es mínima. Las moléculas de la caseína neutras no se repelen eléctricamente y tienden a agregarseprecipitado de la leche.

d) Observe su muestra, indique qué cambios se observan a medida que el pH va disminuyendo.
A medida que el pH va disminuyendo la intensidad del color de la solución también va disminuyendo. La solución siguió siendo homogénea, y al dejarla en reposo se formo un pequeño precipitado.

e) Su muestra de leche será sometida a los siguientes pasos, centrifugación, lavados yresuspensión. Explique el porqué de cada uno de estos pasos.
Centrifugación: Todas las partículas suspendidas en un líquido tienden a separarse espontáneamente, en función del tiempo de una manera natural, por acción de un fenómeno llamado sedimentación, debido a la gravedad terrestre se separa y pasa a ocupar el fondo del recipiente que la contiene, quedando el líquido en la parte superior.1° centrifugación: se obtiene un precipitado solido y blanco con un sobrenadante y se agrega agua destilada. Se mezcla y resuspende el precipitado con el agua agregada y se vuelve a centrifugar.

2° centrifugado: como resultado tenemos un precipitado solido de color blanco y un sobrenadante que se descarta.
El precipitado se le vuelve a agregar agua, resuspendiendo el precipitado en esta,...