Respiración

Metodología
(Utilizamos el método del manual de laboratorio de Biología 3001 con las siguientes modificaciones)

Se tomaron 4 tubos de ensayos limpios y secos. El tubo de ensayo #1 se lerotuló “Blanco”. Al este se le añadió 4.6 mL del “Buffer” de Sacarosa, 0.3 mL de la Suspensión de mitocondrias y 0.1 mL de Succinato. No se le añadió el 2,6-diclorofenol indofenol (DPIP, porsus siglas en inglés) pues era el analito de interés y de esta forma al calibrar el instrumento se eliminan gran cantidad de interferencias que pudieron haber interferido con los resultados. Alos otros tres tubos de ensayo se les añadió lo siguiente: 4.3 mL del “Buffer” de Sacarosa, 0.3 mL de DPIP, 0.3 mL de la Suspensión de mitocondrias y 0.1 mL de Succinato. Debemos enfatizar queno se le añadió el DPIP a ninguno de los tubos hasta el momento de tomar las medidas. Esto debido a que DPIP es un agente oxidante por lo que tan pronto entre en contacto con la solucióncomenzará a reducirse, y ese es el efecto que deseamos observar en las medidas de tramitancia. Todos los tubos tenían un total del 5.0 mL de solución. De los 3 tubos que tenían lo mismo en soluciónse tomó 1 y se rotuló como “Control”, el segundo se rotuló como “Experimento 1”, este fue expuesto a temperaturas frías de aproximadamente 3⁰C. El tercer tubo fue rotulado como “Experimento 2” yfue expuesto a temperaturas de aproximadamente 40⁰C.

Luego se procedió a calibrar el espectrofotómetro. Para esto se manipuló el instrumento para que diera 0.0% de tramitancia cuando lacámara estaba vacia y un 100.0% de tramitancia cuando el “Blanco” estaba dentro de la cámara. Como dijimos anteriormente esto elimina las interferencias. Posteriormente se comenzó a obtenerlos valores de tramitancia para cada una de las soluciones. Se hicieron 7 réplicas en total para cada una de las soluciones y las mismas fueron tomadas cada 5 minutos hasta cumplir los 30...