Rflp

RFLP Method

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Método RFLP - Fragmentos de Restricción Polimórficos
RFLP (a menudo pronunciado "rif" de labios, como si se tratara de una palabra) es un método usado por los biólogos moleculares que seguir una secuencia particular de ADN, que se transmite a otras células. RFLPs se puede utilizar en muchos entornos diferentes para lograr diferentes objetivos. RFLP se puedenutilizar en los casos de paternidad o casos penales para determinar el origen de una muestra de ADN. RFLP se pueden utilizar determinar el estado de la enfermedad de un individuo. RFLP se pueden utilizar para medir las tasas de recombinación que puede llevar a un mapa genético con la distancia entre los loci RFLP mide en cM. En esta página web, usted puede ver cómo se producen los RFLP y, acontinuación tres ejemplos de la aplicación del análisis de RFLP: paternidad, estado de la enfermedad, Y mapeo genético.

RFLP Producción Cada organismo hereda su ADN de sus padres. Dado que el ADN se replica en cada generación, cualquier secuencia dada pueden pasar a la siguiente generación. Un RFLP es una secuencia de ADN que tiene un sitio de restricción en cada extremo con una "objetivo"Secuencia en elmedio. Una secuencia de la blanco es cualquier segmento de ADN que se unen a una sonda mediante la formación de pares complementarios base. Una sonda es una secuencia de ADN de cadena sencilla que se ha etiquetado con radiactividad o una enzima de tal forma que la sonda puede ser detectado. Cuando una sonda de pares de bases a su objetivo, el investigador puede detectar esta unión y saber dóndeestá la secuencia diana desde la sonda sea detectable. RFLP produce una serie de bandas cuando un Southern blot se realiza con una combinación particular de enzima de restricción y la secuencia de la sonda. Por ejemplo, vamos a seguir un particular RFLP que se define por la enzima de restricción EcoR I y la secuencia diana de 20 bases GCATGCATGCATGCATGCAT. EcoR I se une a su reconocimiento seuqenceGAATTC y corta el ADN de doble cadena, como se muestra:

En el segement de ADN se muestra a continuación, puede ver los elementos de un RFLP; una secuencia diana flanqueado por un par de sitios de restricción. Cuando este segmento de ADN es cortada por EcoR I, tres fragmentos de restricción se producen, pero sólo uno contiene la secuencia diana que puede ser obligado por la secuencia de la sondacomplementaria (púrpura).

Echemos un vistazo a dos personas y los segmentos de ADN que llevan a que contienen este RFLP (para mayor claridad, sólo veremos una de las dos bases de ADN). Desde que Jack y Jill son organismos diploides, tienen dos copias de este RFLP. Cuando examinamos una copia de Jack y una copia de Jill, vemos que son idénticas:http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/RFLP.html

18/05/2010

RFLP Method

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Jack 1:-GAATTC --- (8,2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--- (4,2 kb) --- GAATTCJill 1:-GAATTC --- (8,2 kb) ---GCATGCATGCATGCATGCAT--- (4,2 kb) --- GAATTC-

Cuando examinamos sus propios ejemplares de esta segunda RFLP, vemos que no son idénticos. Jack 2 carece de un sitio de restricción EcoR I que Juana tiene 1,2 kb corriente arriba dela secuencia diana (diferencia en cursiva).
Jack 2:-GAATTC - (1,8 kb) -CCCTTT- (1,2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT- (1,3 kb)-GAATTCJill 2:-GAATTC - (1,8 kb) -GAATTC- (1,2 kb) -GCATGCATGCATGCATGCAT- (1,3 kb)-GAATTC-

Por lo tanto, cuando Jack y Jill tienen su objeto de ADN para el análisis de RFLP, tendrán una banda en común y una banda que no coincide con el de otros en el peso molecular:

Casode paternidad
Usemos la tecnología RFLP para determinar si Carlos es el padre del hijo de Jill llamado Payle. En este escenario, se extrajo el ADN de las células blancas de la sangre de los tres individuos y sometidos a análisis de RFLP. Los resultados se muestran a continuación:

En este caso, parece ser que Jack podría ser el padre, ya que heredó el fragmento Payle 12,4 kb de Jill y el...