Reporte rflp´s

Universidad Autónoma de Nuevo León
Facultad de Medicina

Práctica: PCR y Biología Molecular
Análisis de la mutación HIN F I en el gen de la enzima
N5, N10-Metilen-Tetrahidrofolato (MTHRF)

15 de Diciembre de 2010.
Práctica: PCR y Biología Molecular
Análisis de la mutación HIN F I en el gen de la enzima
N5,N10-Metilen-Tetrahidrofolato (MTHRF)

* Objetivo:

Desarrollo de algunas técnicas empleadas en el diagnóstico molecular.

* Introducción:
El diagnóstico molecular está basado en el estudio del ADN, el cual ha experimentado un avance considerable en los últimos años fruto de la identificación, caracterización y cartografiado de un elevado número de genes implicados en patologías humanas. Enla actualidad, el análisis de numerosas patologías genéticas es ya muy bien estudiado. Este tipo de diagnóstico se basa en el empleo de un gran número de técnicas y de la elección d la muestra adecuada para el análisis.
La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR, es una técnica de biología molecular, cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADNparticular, partiendo de un mínimo; basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde. Sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad dicho fragmento amplificado. Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las enzimas ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cualemplea ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.
El término polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción o RFLP, se refiere a secuencias específicas de nucleótidos en el ADN que son reconocidas ycortadas por las enzimas de restricción y que varían entre individuos. Las secuencias de restricción presentan usualmente patrones de distancia, longitud y disposición diferentes en el ADN de diferentes individuos de una población, por lo que se dice que la población es polimórfica para estos fragmentos de restricción. La técnica RFLP se usa como marcador para identificar grupos particulares depersonas con riesgo a contraer ciertas enfermedades genéticas, en ciencia forense, en pruebas de paternidad y en otros campos, ya que puede mostrar la relación genética entre individuos. El ADN de un individuo se extrae y se purifica. El ADN purificado puede ser amplificado usando, luego tratado con enzimas de restricción específicas para producir fragmentos de ADN de diferentes longitudes. Losfragmentos de restricción se separan mediante electroforesis. Esto proporciona un patrón de bandas que es único para un ADN en particular.
Cuando un RFLP normalmente se asocia con una enfermedad de origen genético, la presencia o ausencia de éste puede usarse a modo de consejo sobre el riesgo de desarrollar o transmitir la enfermedad. La suposición es que el gen en el que se esta realmente interesadoestá localizado tan cerca del RFLP que su presencia puede servir como indicador de la alteración en el gen. A veces, un RFLP en particular puede estar asociado con el alelo sano y no con el mutado.
MTHFR (5,10 metilenetetrahidrofolato reductasa) es una enzima del metabolismo del folato y la homocisteína y participa en la metilación del substrato y en la síntesis de los nucloides. El gen está en elcromosoma 1p36.3. La homocisteína se metila para formar metionina mediante dos rutas metabólicas independientes, en las que participan respectivamente las enzimas 5-metil-tetrahidrofolato-homocisteína S-metiltransferasa y la betaína-homocisteína metiltransferasa. La mutación C677T de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) es la principal causa de hiperhomocisteinemia. La mutación MTHFR...