Rutinas De Diagnostico

Programa de Control de Calidad Instrumental

Espectrofotómetros y Fotocolorímetros
Guía práctica de actualización
Claudio Duymovich 1, Rosana Acheme 2, Sandra Sesini 2, Daniel Mazziotta 1

Introducción
1. Licenciado en Ciencias Bioquímicas.
2. Bioquímica.

El espectrofotómetro constituye una herramienta fundamental en
el laboratorio clínico. Más del 90% de las determinaciones que se realizan enQuímica Clínica tienen como paso final la lectura de una absorbancia o una transmitancia. El correcto desempeño de los espectrofotómetros es entonces determinante, en última instancia, de la
calidad analítica de los resultados que emite el laboratorio (1-6).
El objetivo de esta guía consiste en que el bioquímico cuente con
los materiales necesarios para la evaluación del funcionamiento delespectrofotómetro, y de esta manera, pueda verificar si los parámetros fotométricos se encuentran dentro de los rangos de aceptabilidad establecidos de acuerdo a las normativas internacionales.
Se deberán llevar registros que certifiquen dichos controles.
Los estándares de calidad del instrumental deberán cumplirse y por
el contrario si algún parámetro estuviera fuera de rango, es conveniente realizar lareparación del instrumento a través de un servicio técnico
acreditado y luego volver a verificar el buen funcionamiento.

Control de la exactitud de la longitud de onda
NO APTO PARA FOTOCOLORÍMETROS NI AUTOANALIZADORES
Frecuencia del control: semestral
El control se podrá realizar en espectrofotómetros con selector
continuo de longitudes de onda, no así en fotocolorímetros de filtro
ni enautoanalizadotes, ya que en estos no se pueden realizar espectros de barrido.

Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana
Incorporada al Chemical Abstract Service.
Código bibliográfico: ABCLDL.
ISSN 0325-2957

Definición: Grado de concordancia entre la longitud de onda que
indica el seleccionador y la longitud de onda de referencia requerida. Se expresa en nm.
Fundamento: Se utiliza el método del puntoisosbéstico: el rojo
Congo tiene la particularidad que los espectros de las formas ácida y
básica del colorante en igual concentración presentan la misma absorbancia a una longitud de onda denominada “punto isosbéstico”

Acta Bioquím Clín Latinoam 2005; 39 (4): 529-39

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Duymovich C y col.

(PI). Esta longitud de onda es independiente de la
concentración del colorante y de la temperatura de
trabajopor lo cual resulta un parámetro fijo de referencia. Si el punto isosbéstico hallado experimentalmente difiere del teórico, indica que existe un corrimiento en la longitud de onda (7)(8).
Procedimiento
El estudio consta de 3 pasos:
a) Preparación de las formas ácida y alcalina del
colorante
b) Realización del espectro de barrido
c) Interpretación de resultados: gráfico del espectro para hallar elPI
Reactivos requeridos
Solución de Rojo Congo 14 mg/L
HCl 2,5 N
NaOH 2,5 N
a) Preparación de las formas ácida A y alcalina B del
colorante.
Alicuotar con una misma pipeta 5 mL de solución
de Rojo Congo 14 mg/L en dos tubos de ensayo rotulados A y B.
Solución A: al tubo A agregarle 20 uL de la solución
de HCl 2,5 N
Solución B: al tubo B agregarle 20 uL de la solución
de NaOH 2,5 N
Usar una únicamicropipeta para dispensar los 20 uL.
Las soluciones A y B una vez preparadas son estables 1 hora a temperatura ambiente.
b) Realización del barrido espectrofotométrico de las soluciones A y B entre 520 y 570 nm.
Se deberá realizar el espectro de las soluciones A y
B contra agua destilada. Se puede trabajar a temperatura ambiente ya que el punto isosbéstico es independiente de la temperatura entre4 y 45 ºC.
Se recomienda proceder de la siguiente manera:
b1) Método manual para espectrofotómetros con
cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor.
(Método que utiliza una cubeta)
Llenar una cubeta con agua destilada y ajustar el cero de absorbancia a 520 nm. El regulador de absorbancias no se tocará más durante toda la experiencia.
Leer y registrar las absorbancias a las longitudes de
onda...