Salud Publica

COLORACION DE ZIEHL - NEELSEN

Variante clásica o "en caliente"
1. Hacer un frotis de la muestra.
2. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Unfrotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinción.
3. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en unagradilla de tinción con los extendidos hacia arriba. Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez.
4. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.
5. Aplicar fucsina-fenicada.
a. Deje que elcolorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este período.
6. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).
b. Se requiere eltiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante.
c. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos conagua corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.
7. Decolorar conalcohol-ácido.
d. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 10 minutos. Enjuague con agua una vez más los portaobjetos y quite elexceso de agua. Si los portaobjetos aún están rosa, aplique una cantidad adicional de la solución decolorante de 1 a 3 minutos.
8. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
e. Aplique lasolución de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.

9. Enjuagar con agua
f. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua.Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.

10. Ahora colóquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 100 x 100...