Sds Electroforesis

ELECTROFORESIS EN GELES SDS-PAGE

1- Revisar que los cristales estén limpios, y una vez comprobado, limpiar con 96% EtOH. Secar con papel, comprobando que no queden pelitos. Poner los cristalesen los soportes adecuados. Para cuadrarlos en los soportes verdes, hacerlo sobre una superficie plana, mientras los cerramos hacemos presión leve contra la superficie (ej. mesa). Comprobamos que elsistema no se va a salir el gel al echarlo entre los cristales, probamos con AGUA.

2- Elaboración de geles de resolución y concentrador.

* Lower gel = Gel de resolución= Resolving gel| | | 10 ml Vol. final | | |
| LOWER GEL |
| 5% | 7% | 10% | 12% | 15% |
SDS 10 % * | 100 µl | 100 µl | 100 µl | 100 µl | 100 µl |
Lower Buffer 4x | 2,5 ml | 2,5 ml | 2,5 ml |2,5 ml | 2,5 ml |
Acrilamida 30 % | 1,7 ml | 2,3 ml | 3,3 ml | 4 ml | 5 ml |
H2O | 5,8 ml | 5,2 ml | 4,2 ml | 3,5 ml | 2,5 ml |
TEMED | 25 µl | 25 µl | 25 µl | 25 µl | 25 µl |
APS| 50 µl | 50 µl | 50 µl | 50 µl | 50 µl |

La cantidad a usar depende del número y grosor de los geles. Un gel de 0.75 mm necesita como 4 ml; 1 mm, 6 ml; 1.5 mm 7-8 mm. También depende de cómo degrueso queramos el stacking.

* Elaborar receta correspondiente en tubo de 10 ml y al final, echar el gel rápidamente con P1000 o directamente.
* Rápidamente, echar aproximadamente 1ml de isopropanol gota a gota. Esto hace que el gel quede recto y quita las burbujas.
* Dejar el gel sobrante en el tubo de 10 ml destapado, nos servirá para saber cuándo ha polimerizado elgel entre los cristales.
* Una vez polimerizado, quitamos el isopropanol y lavamos bien con agua destilada.

* Upper gel: Gel concentrador- Stacking gel 10 ml vol final
* Echamosel Upper gel con p1000 ó directamente con el tubo y poner rápidamente el peine que serán los pocillos.
SDS 10 % * | 100 µl |
Upper Buffer 4x | 2,6 ml |
Acrilamida 30 % | 1,2 ml |
H2O |...