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TIPOS DE MICROSCOPIOS






MICROSCOPIAS ÓPTICAS ESPECIALES

La microscopia más utilizada para la visualización de preparaciones es la de campo claro. Existen otros tipos de microscopias desarrolladas sobre todo, por la necesidad en biología de observar preparaciones que no pueden ser teñidas. Estas microscopías se basan en el fenómeno de interferencia. Mediante la adición de accesoriosespecíficos, se pueden obtener distintos tipos de microscopía en un microscopio óptico:
- de campo claro: la más convencional. Se ilumina la muestra con toda la intensidad de la luz. Es preferible que las preparaciones estén teñidas para su observación
- de campo oscuro: la iluminación incide sobre la preparación de forma tangencial, de forma que se obtiene un fondo oscuro sobre el cual seobservan puntos luminosos que son producto de la luz dispresada por las partículas más pequeñas presentes en la preparación
- de contraste de fases: se utiliza, sobre todo, para la observación de preparaciones sin teñir. Se basa en que, a pesar de que el material biológico sin teñir apenas absorbe radiación luminosa, sí produce cambios de fase en la luz que lo atraviesa. Basado en el principio deinterferencias.
- De contraste interferencial o Nomarski: proporciona sensación de relieve. Basado en el principio de interferencias.
- De fluorescencia: se utiliza para detectar la emisión fluorescente de moléculas. Un tipo especial es la microscopía confocal.

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

A diferencia del MO, en el ME: -los elementos están arquitectónicamente invertidos, con la fuente deiluminación en posición superior - el haz de electrones se consigue a partir de un filamento metálico de tugsteno o lantano, al aplicarle una corriente eléctrica de alto voltaje. Los electrones tienen muy poca capacidad de penetración y, por lo tanto, hay que acelerarlos mucho . - Las lentes utilizadas en elos MO son de vidrio, mientras que en el ME son solenoides capaces de modificar la trayectoria de loselectrones mediante campos electromagnéticos. -Los ME requieren un sistema de vacío muy elaborado para evitar la presencia de moléculas de aire en la columna que interfieran con la trayectoria de los electrones. - La muestra que queramos observar será también introducida en el vacío y se colocará en la trayectoria de los electrones. La muestra debe ser capaz de soportar las condiciones de vacío yde calentamiento producido por los propios electrones al contactarla. - Los electrones constituyen una radiación de baja penetración y, por tanto, no pueden atravesar muestras del grosor de las utilizadas en MO. Los cortes para ME deben ser de muy poco grosor; ultrafinos (60-100 nm) - Nuestros ojos no son capaces de ver electrones. Para poder visualizar la imagen producida por ellos al atravesarla muestra, se coloca una pantalla fosforescente al final del trayecto del haz. Esta pantalla es excitada por los electrones que han atravezado la preparación y emite luminiscencia. Las zonas que quedan oscuras en la pantalla son aquellas que no han sido excitadas por los electrones porque éstos, en su trayectoria, han sido dispersados por elementos de la muestra. La imagen, por tanto, no puede seren color. Hasta ahora hemos descrito lo que se denomina ME de transmisión (TEM).
Existe un segundo tipo de ME, el de barrido o scanning (SEM). En el de transmisión, los electrones pasan a través de una sección muy fina de tejido para producir una imagen bidimensional en una pantalla fosforescente. La claridad de un área particular de la imagen, formada en la pantalla fosforescente, esproporcional al número de electrones que han atravesado la muestra. Por el contrario, la ME de barrido constituye un método muy útil para el estudio de la morfoestructura superficial de las muestras biológicas. Permite el estudio tridimensional de la superficie de las muestras. Para ello, se utiliza también un ME, pero el haz de electrones se desplaza sobre la muestra realizando un barrido de su...