Segregación De Dos Caracteres En Drosophila Melanogaster

INTRODUCCIÓN.

El objetivo del presente trabajo es realizar un análisis genético. Para ello, se han hecho las observaciones sobre la segregación fenotípica de una segunda generación filial (F2). Dicha F2 es el resultado de un cruzamiento inicial entre dos líneas puras (homozigotas para todos sus pares génicos) de Drosophila melanogaster que difieren en dos genes (líneas parentales) y elposterior autocruzamiento entre los dobles heterozigotos resultantes que forman la primera generación filial (F1).
A partir de los datos obtenidos se pretende averiguar si los genes analizados son autosómicos o bien están ligados al sexo; la posibilidad de que estén ligados entre si o presenten segregación independiente, así como la posible aparición de genotipos letales.
En el caso de que losgenes estén ligados, se calculará la distancia cromosómica entre sus respectivos locus.



1. MATERIALES Y MÉTODOS.

2.1 Líneas mutantes de D. melanogaster.

Se dispone de dos líneas puras mutantes de D. melanogaster que presentan las siguientes características fenotípicas:
*Línea 1: Ojo oscuro.
*Línea 2: Cuerpo oscuro.
Ambas líneas se conoce que difieren en dos genes.

2.Medio y temperatura de cultivo.

Las moscas y sus larvas se crían en frascos de vidrio que contienen como alimento el medio de cultivo cuya composición y preparación se describen seguidamente.
Ingredientes:
*100 g de azúcar.
*100 g de levadura.
*10 g de agar (espesante).
*1 L de agua.

Se mezclan los ingredientes en un matraz y se calienta hasta llevar a ebullición.Después se deja enfriar la mezcla y se controla la temperatura para, cuando alcance los 50 ºC, añadir 5 mL de propanoato.
El medio así preparado se distribuye en las botellas antes de que solidifique.

Las moscas se cultivan a una temperatura ambiental de 24 ºC. A esta temperatura, el tiempo entre generaciones es de unos 15 días.

3. Sistemas de Anestesia.

Se dispone de conductosde suministro de CO2 regulables mediante llaves de paso. Mediante un conducto de boca ancha en el que insertamos la botella con moscas, hacemos llegar el gas a las moscas durante unos segundos, tras los que extraemos los individuos anestesiados a una placa porosa, conectada al circuito de suministro, que permite el paso a su través del gas.


4. Contaje de Individuos.

En el contaje de lasmoscas, se las manipula mediante lancetas y pinceles con la ayuda de una lupa de laboratorio.
Para distinguir machos y hembras nos servimos de las diferencias que presentan ambos sexos, tal como se detalla en las figuras más abajo.




Figura 1. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster. A la izquierda, una hembra y a la derecha un macho (ambos de fenotipo silvestre). Lasdiferencias más reseñables se presentan en el abdomen: En machos presenta una mancha oscura más amplia e intensa y en hembras es más afilado hacia el extremo. Por otro lado, los machos presentan un peine sexual en el metatarso del primer par de extremidades, que se aprecia como una mancha oscura.



2. DISEÑO EXPERIMENTAL.

3.1 Elección de parentales.

Los parentales (P) con las mutaciones sonlíneas puras, mantenidas como stocks en laboratorio. Difieren en dos genes, en este caso, los que determinan el color del cuerpo y de los ojos.

2. Obtención de la F1.

Con el fin de garantizar que los descendientes que aparecen proceden exclusivamente del cruzamiento que hemos diseñado, se deben escoger hembras vírgenes. Para ello, se seleccionan las hembras unas pocas horas tras emerger desus pupas (aproximadamente 6 horas después de salir de la pupa ya son fértiles).
Escogemos un número suficiente de hembras de cuerpo oscuro y machos de ojo oscuro y los introducimos en un bote con medio fresco, previa anestesia.
A los dos días empiezan a tener descendencia (F1). Los progenitores deben eliminarse del cultivo antes de que aparezca la descendencia adulta. (Si se observa un...