Soluciones buffer

Universidad Andrés Bello
Facultad de Ciencias biológicas
Departamento de Ciencias biológicas
Laboratorio de Bioquímica I






INFORME N°2
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
(Buffer Lower pH 8.8 1,5M TRIS)

Introducción
El agua puede comportarse como ácido y como base, si realizamos la fórmula del equilibrio de disociación del agua y le aplicamos la ley de acción de masa tendremoscomo resultado que el agua sin disociar es constante (considerando que el agua es pura), de esto obtenemos Kw (anexo 1), que tiene un valor de 1X 10-14 a 25°C, este valor representa la multiplicación de los protones y los hidroxilos provenientes de la disociación teniendo cada uno un valor de 1x10-7. Así también como se disocia el agua hay miles de sustancias que hacen lo mismo, basándonosen lo anterior si queremos explicar un estado de acides o basicidad de una disolución emplearemos el concepto de Ph , que es el menos logaritmo de la concentración de protones. Teniendo en cuenta todos estos conceptos podremos comprender mejor lo que es un buffer: “Una solución tampón o amortiguador es aquella que resiste los cambios de Ph de un sistema, todos los ácidos y bases débiles enpresencia de su sal forman soluciones tampones.” ( 1) Los buffer reaccionan ante la disminución del ph mediante la captación de protones por la base y cuando el ph aumenta el acido libera protones al medio, manteniendo un equilibrio. Los buffers son de gran importancia debido a su participación en la regulación de los sistemas biológicos como por ejemplo el acido láctico que se produciría alentrar en movimiento los músculos, produciendo variaciones de ph peligrosas para la vida (2). Es por esta razón que para poder comprender y estudiar mejor los sistemas bilógicos requerimos de soluciones buffer, en nuestro laboratorio prepararemos 11 buffers con características diferentes en cuanto a las áreas del laboratorio.


Objetivos
Aprender a realizar cálculos básicos en preparación desoluciones.
Preparar de la lista de buffers, el Buffer Lower pH 8.8 1,5M TRIS.








Materiales y métodos
Materiales:
18.165 g de Tris
HCl
4 ml SDS 10%
H2O destilada
Matraz aforado 100ml
2 vasos precipitado de 100ml
Pipeta
Pro- pipeta
Gotario
balanza
Varilla de agitación
Peachimetro


Para preparar el Buffer Lower pesamos 18.165 g de Tris y lo disolvimos en 60 ml deagua destilada, posteriormente ajustamos Ph mediante la adición de HCl con un peachímetro , una vez estabilizado el pH a 8.8 preparamos 1 g de SDS en 10 ml de agua destilada. Procedemos a disolverlo con mucho cuidando para evitar la formación de burbujas y le adicionamos 4 ml a la solución anterior, por ultimo mezclamos la disolución muy suavemente.










Resultados
Buffers TrisGlicina
Solución Stock 5X 0.250 L (3.775 gr Tris base – 23.5 gr glicina)
SDS
10 g/100ml = Xg/ 20 ml → X g
= 2 g de SDS
Solución de Trabajo 1X

Buffers TAE
50X 0,250L (60.5 g Tris base – 14.275 gr Acido acético)
EDTA
Gramos = PM x M x L = 0,5 mol/L x 25 mL x 372,24 g/mol =4,653 g
1X

Buffers Lower/Upper TRIS:
Lower pH 8.80, 1.5M (18.165 gr Tris)
Para agregar un equivalente de4ml al 10% de SDS a partir de una solución 10%
C1xV1=C2xV2 => 10% x X = 10% x 4ml=> X= 4.00ml
Upper pH 6.80, 0.5 M (6.055 gr Tris)
Para agregar un equivalente de 4ml al 4% de SDS a partir de una solución 95%
C1xV1=C2xV2 => 10% x X = 4% x 4ml=> X= 1.60ml

Buffer Fosfato de Sodio 1m (100ml)
Gramos de Na2HPO4 = 141,96 g/mol X 0,1 L X 1M = 14,196 g
Gramos de NaH2PO4 = 119,98 g/mol X0,1 L X 1M = 11,998 g

Buffer Carga 6X geles DNA
Glicerol
C1xV1=C2xV2 => 50gr x 20ml = 100 gr x x ml=> X= 10 ml
TRIS
Gramos = PM x M x L = 121.14 g/mol x 0.01 mol/L x 0.020 L = 0.024 gr
EDTA
Gramos = PM x M x L = 372.24 g/mol x 0.001 mol/L x 0.020 L = 0.007445 gr
Azul de Bromofenol
Gramos = PM x M x L = 372.24 g/mol x 0.15 mol/L x 0.5 L = 27.918 gr

Buffer Citrato (pH 5.00)
Citrato de...