Técnico de laboratorio

PRACTICAS PARA CONOCER
LOS ESPECTROFOTÓMETROS


Bioquímica


PRACTICA 1: ESPECTRO DE ABSORCIÓN

INDICE:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Introducción
Objetivos
Fundamento
Técnica
Resultados
Interpretación de resultados.

3
3
3
4
6
6

1.- INTRODUCCIÓN
La es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de
moléculas. Se caracteriza por suprecisión, sensibilidad y si aplicabilidad a moléculas de
diferente naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc.) y estado de agregación (sólido,
líquido, gas).
En esta práctica estudiaremos la absorción de luz en el K2Cr2O7 0,1 % al 1/10. Cuando
una molécula absorbe un fotón en este intervalo espectral, se excita pasando un electrón
de un orbital del estado fundamental a un orbital excitado deenergía superior.

2.- OBJETIVOS
-

Realizar correctamente una solución madre
Realizar correctamente una solución hija a partir de la solución madre.
Aprender el funcionamiento del espectrofotómetro.
Realizar un espectro de absorción de la solución hija con una longitud de onda
que va desde 300nm hasta los 400nm
Realizarlo todo cumpliendo las normas de seguridad del laboratorio.

3.-FUNDAMENTO
Por medio del análisis de absorción el espectrofotómetro puede proporcionarnos datos
para determinar las concentraciones de los componentes de las sustancias. Con esto, se
puede crear un análisis cuantitativo y cualitativo de los datos y usar una curva estándar.
La absorbancia o reflexión de la longitud de onda determinada, es una propiedad física
que puede proporcionarnos datos quelo determinan.

4.- TÉCNICA
1. Realizar los cálculos correspondientes:
-

Solución madre K2Cr2O7 0.1 %  100ml por mesa
% P/V
% P/V =
0.1% =
Gr de soluto = 0.1 gr
0.1 gr de K2Cr2O7 en 100ml de H2O

-

Preparar 50ml de K2Cr2O7 0.1% al 1/10
0.1%

hija

C1 x V1 = C2 x V2
0.1% x V1 = 0.01% x 50 ml
V1= 5ml
Como los matraces son de 100ml haremos los de dos personas por lo queecharemos 10 ml
10ml de K2Cr2O7 al 0.1 % y enrasaremos hasta llegar a 100ml con agua destilada.
2. Preparar el material necesario para realizar la práctica:
- Papel de filtro.
- Matraz aforado de 100ml , 2 (madre e hija)
- Vidrio de reloj
- Cucharilla
- Tapones para el matraz aforado
- Vaso de precipitado
- Pipeta de vidrio de 2ml
- Pipeta Pasteur
- Auxiliar de pipeteo
- Embudo.

3.-Pesar en la báscula 0.1 gr de soluto en un vidrio de reloj
4. Verter el soluto en el matraz aforado de 100ml y enrasar hasta los 100ml con una
pipeta Pasteur.
5. Agitar suavemente para que se mezclen los componentes.
6. Con una pipeta de 10ml tomar 10ml de la solución madre y verter en un matraz
aforado de 100ml.
7. Enrasar con agua destilada hasta 100ml y agitar suavemente dando lugar a lasolución
hija.
8. Llevar al espectrofotómetro y medir la absorbancia desde 300nm hasta 400nm,
variando de 10 en 10 la longitud de onda. Realizando el 0 de absorbancia antes de la
medición de la solución hija. Pasos a seguir en el espectrofotómetro:
-

Pulsar menú
Barrido  Enter
λ: Inicio 315nm
Final 400nm
Tabla de picos Enter, seleccionar picos Enter
Meter cubeta del “0”
Pulsar ZeroBase
Sacar cubeta “0” y meter cubeta con la muestra Run
Observar la gráfica que me sale en la pantalla
Pulsar ver resultados

5. RESULTADOS
Longitud de Onda

Absorbancia

351nm

1,179

La λ óptima es de 351 con 1’179 de absorbancia para el K2Cr2O7

6.- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Después de realizar los cálculos, preparar la solución y medir la absorbancia en elespectrofotómetro podemos deducir que la λ máxima a la que se mide la solución de
K2Cr2O7 es de 351nm. Con esta solución todo lo que queramos realizar en el
espectrofotómetro lo haremos a ésta longitud de onda.

PRACTICA 2: CURVA DE CALIBRACIÓN

INDICE:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Introducción
Objetivos
Fundamento
Técnica
Resultados
Interpretación de resultados.

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8
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10
10

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