Tecnologías de la información basadas en el DNA. Mutagénesis dirigida y transgénesis.

Universidad de La Habana
Facultad de Biología



TRABAJO DE CURSO DE MÉTODOS BIOTECNOLÓGICOS








Título: Tecnologías de la información basadas en el DNA. Mutagénesis dirigida y transgénesis.


Autores: Jessica Ríos Padrón

Filiación: 2do Bioquímica, Facultad de Biología, Universidad de La Habana, calle 25 e/I y J, No455, C.P. 10400, Vedado, Plaza dela Revolución, Ciudad de La Habana, Cuba

Autor de correspondencia: Jessica Ríos Padrón, jríos@est.fbio.uh.cu





















Introducción
La genética, al volverse molecular, se ha rápidamente convertido en una parte integral de la mayoría de los campos biológicos.
En todas las disciplinas como Fisiología, Embriología y Oncología, Biología del desarrollo y Biologíacelular, Ecología y Evolución, los fenómenos en cuestión están asociados con la expresión de genes específicos, los que ahora pueden ser localizados e identificados, clonados y modificados a conveniencia por mutagénesis dirigida, y de este modo los efectos pueden ser estudiados en un contexto particular, in vitro, ex o in vivo. La Genética Molecular, y dentro de esta las tecnologías de lainformación basadas en el DNA, constituyen una herramienta extraordinaria porque potencialmente permiten la apertura de todas las “cajas negras “que en estas disciplinas representan acercamientos pertinentes, pero esencialmente descriptivos, sin tener que tomar en cuenta un punto de vista global o acercamiento holístico de los fenómenos o de las estructuras estudiadas (Serre, 2006).
En este trabajo decurso, pretendo hacer una breve compilación de las técnicas de la información basadas en el DNA estudiadas, abarcando la clonación del DNA, las técnicas de mutagénesis dirigida (sitio específica o in vitro) y de transgénesis, así como las aplicaciones biotecnológicas de las tecnologías de DNA recombinante discutidas.

Objetivos:
• Analizar las características de la mutagénesis dirigida apoyándoseen ejemplos concretos y teniendo en cuenta su importancia experimental y describir los fundamentos de los métodos de mutagénesis dirigida, sus ventajas y limitaciones.
• Analizar los métodos de transgénesis más empleados teniendo en cuenta sus posibilidades y limitaciones así como su importancia experimental.
• Exponer aplicaciones y objetivos de los métodos de mutagénesis dirigida (sitioespecífica o in vitro) y de transgénesis en el campo de la Biotecnología.
























Desarrollo
1. Clonación del DNA: fundamentos

La clonación del DNA comporta la separación de un gen especifico o de un fragmento de DNA de un cromosoma mucho mayor, y su unión a una pequeña molécula de DNA portador, para replicar este DNA modificado mil e incluso millones deveces, mediante el aumento del número de células y la creación de múltiples copias del DNA clonado en cada célula. El resultado es la amplificación selectiva de un gen o segmento de DNA particular. La clonación del DNA de cualquier organismo comprende cinco procedimientos generales:
1. Cortar el DNA en lugares determinados. Las endonucleasas específicas de secuencia (endonucleasas de restricción)actúan de tijeras moleculares.
2. Selección de una pequeña molécula de DNA capaz de autorreplicarse. Estos DNA se denominan vectores de clonación (un vector es un agente de entrega). Normalmente se trata de plásmidos o de DNA víricos.
3. Unión covalente de dos fragmentos de DNA. La DNA ligasa une el vector de clonación y el DNA que se desea clonar. Las moléculas de DNA compuestas por segmentosunidos covalentemente, procedentes de dos o más fuentes, se denominan DNA recombinantes.
4. Traslado del DNA desde el tubo de ensayo hacia el interior de una célula huésped que proporcionará la maquinaria enzimática necesaria para la replicación del DNA.
5. Selección o identificación de las células huésped que contienen el DNA recombinante.
Los métodos utilizados para llevar a cabo estos...