Tema4 Proteinas

Tema 4. Proteínas: funciones biológicas y estructura primaria.
Enlace peptídico. Péptidos y proteínas. Diversidad de funciones
biológicas. Niveles de organización estructural de las proteínas.
Separación y purificación de proteínas. Estructura primaria.
Información a partir de la secuencia de aminoácidos. Proteínas
homólogas. Métodos de análisis de proteínas

BIOQUÍMICA-1º de Medicina
Dpto.Biología Molecular
Jesús Navas

LOS AMINOÁCIDOS SE PUEDEN UNIR POR ENLACES PEPTÍDICOS

Dos aminoácidos

Eliminación de una
molécula de agua

Enlace peptídico

... Formación del enlace
CO-NH
Extremo amino
TEMA 4

Extremo carboxilo
Garret & Grisham , 1999 2

PEPTIDOS Y PROTEINAS
•
•
•
•

Péptido: hasta 50 aminoácidos.
Oligopéptido: péptido pequeño.
Polipéptido: péptido grande.
Proteínas oligoméricas:formadas por
subunidades idénticas llamadas protómeros.
• Proteínas sencillas y conjugadas (grupo
prostético)
TEMA 4

3

SECUENCIA DE LA
INSULINA DE VACA
La insulina tiene dos
cadenas unidas por dos
puentes disulfuro. La
cadena A tiene 21 aa y la
B tiene 30 aa.

TEMA 4

Garret & Grisham , 1999 4

TEMA 4

5

TEMA 4

6

Clasificación de proteínas según su grupo prostético

(Lehninger, 2000)7

TEMA4

Niveles de organización de las proteínas

Estruct. primaria

Aminoácidos

TEMA 4

Estruct. secundaria

Hélice alfa

Estruct. terciaria

Cadena polipeptídica

Estruct. cuaternaria

Subunidades ensambladas

(Lehninger, 2000)8

Factores que determinan la
conformación proteica
Además de la estructura primaria, las condiciones
físico-químicas del entorno: cambios en el pH,
concentración salina,temperatura, otros factores
ambientales.
Desnaturalización es la pérdida de la conformación
de una proteína.
Una proteína desnaturalizada pierde su actividad
biológica.
TEMA 4

9

Clasificación de proteínas según su grupo prostético

TEMA 4

(Lehninger, 2000)
10

PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE PROTEÍNAS
1. Obtención del extracto crudo
2. Fraccionamiento del extracto crudo por precipitación con sulfatoamónico y diálisis
3. Cromatografía en columna:
•
•
•

Por su carga: cromatografía de intercambio iónico
Por su masa: cromatografía de filtración molecular
Por sus propiedades biológicas: cromatografía de afinidad

4. Electroforesis en gel:
•
•
•

Electroforesis en poliacrilamida-SDS
Enfoque isoeléctrico
Electroforesis bidimensional

TEMA 4

11

Diálisis

TEMA 4

12

Cromatografía
intercambioiónico

TEMA 4

(Lehninger, 2000)
13

Cromatografía
de exclusión
molecular

TEMA 4

(Lehninger, 2000)
14

W

Cromatografía
de afinidad

TEMA 4

(Lehninger, 2000)15

Separación de proteínas por electroforesis
en geles de poliacrilamida-SDS

TEMA 4

16

Patrones

Determinación de la masa molecular de una proteína por
electroforesis en poliacrilamida-SDS

TEMA 4

17

Sangre: células y proteínasplasmáticas
• La sangre es un sistema de transporte y
distribución de nutrientes.
• Está formada por una solución acuosa que
contiene moléculas de tamaño variable y diversos
tipos de elementos celulares.

TEMA 4

18

Plasma y suero
• Los elementos formes de la sangre se encuentran
en una suspensión acuosa denominada plasma. Es
el sobrenadante obtenido al centrifugar una
muestra de sangre tratada conanticoagulante.
• Suero: sobrenadante obtenido al centrifugar una
muestra de sangre después de haber dejado que
coagule. La mayoría de las determinaciones
químicas se hacen en suero.
TEMA 4

19

Proteínas plasmáticas
• Sintetizadas en el hígado: albúmina.
• Producidas por las células plasmáticas de la
médula ósea: inmunoglobulinas.

TEMA 4

20

- 50% de la proteína plasmática humana
- Concentración ensangre: 35-55 g/l
- Pm = 66 kDa, muy soluble en agua.
- A pH 7 es un polianión con 20 cargas negativas (fija muchos
ligandos)
- Posee hendiduras hidrófobas capaces de fijarse a ácidos grasos
TEMA 4

21

PROTEINOGRAMA
•
•
•

Proteínas totales: 6-8 g/100ml
Albúmina: 3’5-5’5 g/100 ml
Globulinas: 2-3 g/100 ml
ELECTROFORESIS

Albúmina
Globulinas
α1
α2
β
γ
TEMA 4

45-55 % total
5-8 %
8-13 %
11-17 %...