Ticion de gram

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Tinción de Gram
Noé Flores Ramírez
DESARROLLO PRÁCTICO.
En primer lugar encendemos el mechero, ya que para realizar cualquier estudio de una muestra bacteriana, debemos usar la técnica aséptica para evitar la contaminación de la muestra.
Usamos un asa de siembra, aparato fundamental en la preparación de frotis y cultivos. La calentamos al rojo en el mechero y a continuación cogemos una gotade agua el asa y la depositamos en el portaobjetos que previamente habremos preparado. Volvemos a esterilizar el asa y con otra mano abrimos un tubo de ensayo tapado con un algodón donde se encuentra el inoculo a sembrar. Con cuidado introducimos el asa, evitando que el asa mate por excesivo calor a los microorganismos, dando unos golpecitos dentro del tubo y mojando el asa en el tubo un poco.Cerramos el tubo y colocamos el inóculo en el portaobjetos, haciendo un frotis con él. Fijamos a la llama cuidadosamente con ligeros pases con el mechero y dejamos secar.
A continuación hacemos la tinción de Gram de la forma antes explicada, usando un barreño para evitar el desparramamiento de los colorantes y el agua por el laboratorio. Hay que tener cuidado en la cantidad de colorantes a usar,con una gota suele ser suficiente. Una vez hecha la tinción dejamos secar de nuevo.
Ahora nos dirigimos al microscopio. Preparamos el objetivo de inmersión echando un poco de aceite de cedro al cubre. Esta gota de aceite crea una fina película entre objetivo y muestra , que disminuye el índice de refracción de la luz, mejorando la visión de la muestra.
En la practica observamos estreptobacilos,en forma de bastoncillos, algunos de ellos representados con manchas blancas en su interior que se identificaban con esporas y tétradas de cocos, bacteria de forma redondeada.
Observamos también a las bacteria lácticas de una muestra de yogur.
Todas las bacterias observadas eran gram+.
MATERIAL USADO
Un vaso lavador
Un asa de siembra
Una gradilla con tubos de ensayo con el microorganismo enmedio sólido (Agar como coloide.)
Una placa de Petri
Barreño para los restos de los colorantes por los lavados
Portaobjetos
Microscopio
PRACTICA II: SIEMBRA, RECUENTO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS.
 OBJETIVOS Y FUNDAMENTOS TEORICOS
Esta práctica se caracteriza por ser uno de los procedimientos más usados en un laboratorio de microbiología. Se trata de la siembra de un inóculo y elposterior recuento y aislamiento de unos microorganismos.
Refiriéndonos a la siembra de un inoculo y su proliferación creando un cultivo hay diversos métodos y formas. Nosotros nos ceñiremos a cultivos semisintéticos generales. Según el medio físico podemos ver cultivos:
 Sólidos: En ellos el coloide se echa en forma de gel que se solidifica más tarde. El agente solidificante suele ser el agar. Elcultivo sólido puede ser en placas de Petri o en tubos de ensayo.
 Líquidos o caldos: Son soluciones acuosas de nutrientes diversos para que proliferen las bacterias.
Como puede deducirse los métodos de siembra para formar colonias solo pueden hacerse en medio sólido, ya que en medio líquido las bacterias están dispersadas.
Entre los métodos más destacados encontramos:
 Siembra poragotamiento en estrías oblicuas: Con el asa de siembra se coge el material y se hacen estrías en el agar. A continuación se esteriliza por flameado y se vuelven a hacer estrías cruzadas, con el objetivo de poner en estas estrías el excedente de las primeras estrías.
 Siembra por agotamiento en zigzag: Con el asa de siembra sembramos el inóculo en zigzag de manera que conforme avancemos en la placa oel tubo de ensayo habrá menos inóculo y será más fácil luego distinguir y aislar las colonias.
 Siembra en masa: Es un tipo especial de siembra indicada para el recuento de microorganismos. Se usa una mezcla de medio de cultivo y agar fundido a 45ºC, donde se echa también una solución de microorganismos, que deben estar diluidos varias veces anteriormente, ya que luego para contar las...
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