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UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD

Ingeniería Bioquímica I

PRÁCTICA # 4

DETERMINACION DE LOS PARAMETROS CINETICOS DE LA INVERTASA

Grupo: BD08A
Profesora: ARACELI TOMASINI

Fecha de entrega: 16/Noviembre/11
Equipo # 2
Integrantes:
Aldana Elizalde Edgar
Ballesteros Monroy Jennifer
Cruz Ramírez Gabriel Kristofer
Zarate Bonilla Josué 
Introducción
La cinética enzimática es la rama de la enzimatología que trata de los factores, que afectan a la velocidad de las reacciones catalizadas enzimáticamente. Dos parámetros de suma importancia en el estudio de las reacciones catalizadas por enzimas son la velocidad máxima (Vmax) a la que una enzima es capaz de trabajar y la constante de afinidad (Km) que nos expresa precisamente larelación de afinidad que tiene una enzima y su sustrato.
La velocidad máxima que presente nuestra enzima es importante parámetro para su estudio, dicho punto teóricamente será alcanzado cuando la concentración de nuestro complejo Enzima-sustrato alcance un valor máximo. Esta concentración máxima ocurre, por lo tanto, cuando toda la enzima disponible forma parte del complejo con el sustrato, esdecir cuando la concentración de enzima libre es igual a cero. Esta condición se conoce como saturación de la enzima con el sustrato. Dicha velocidad es por lo tanto una función de la concentración de la enzima en nuestro ensayo. Gracias a los parámetros de Velocidad Máxima y Constante de Michaelis, podemos evaluar a qué velocidad se dará la reacción para una concentración de sustrato dada,mediante la expresión:
Vo = Vmax [S] / (Km + [S])

El valor numérico de km es de interés, entre varias razones, porque: a) la km establece un valor aproximado para el nivel intracelular del sustrato. b) Puesto que km es constante para un enzima dado, su valor numérico proporciona un medio de comparación de los enzimas de los diferentes organismos o de los diferentes tejidos del mismo organismoo del mismo tejido en las diferentes etapas del desarrollo. Los valores de Km de las enzimas varían ampliamente. Para la mayoría de las enzimas Km varía entre 10-1 y 10-6 M. El valor de Km para una enzima depende de cada sustrato particular y también de las condiciones ambientales como la temperatura y la fuerza iónica. Km es la concentración de sustrato a la cual la mitad de los centrosactivos están ocupados, Km se relaciona con la constante de velocidad de las etapas individuales. Un km alta indica una unión débil, una Km baja indica una unión fuerte. Km indica la afinidad del complejo ES. La Vmax revela además el número de recambio de una enzima, si se conoce la concentración de los centros activos. Los números de recambio de la mayoría de las enzimas para sustratos fisiológicososcilan entre 1 y 104 por segundo.

Las prácticas de laboratorio normalmente evalúan ambos parámetros cinéticos y esbozan la(s) gráfica(s) de comportamiento de la enzima en estudio en función de la concentración de sustrato. Las unidades utilizadas para los cálculos son UIEI puesto que de esa manera es fácil expresar y visualizar la velocidad de nuestra reacción. Esto es debido a que dichasunidades nos expresan cuántas micromoles de sustrato son transformadas por litro de solución cada minuto

Objetivo
Aprender la metodología de determinación de los parámetros cinéticos (Km y Vmax) de una enzima mediante las velocidades iniciales de reacción a diferentes concentraciones de sustrato.

Resultados
Tabla 1. Reporta absorbancia a 595nm para determinar proteínas solubles por método deBradford. Con base a la ecuación lineal y = 0.0181x + 0.0022 (pract1) se obtiene la concentración en g/mL de proteína soluble.
Determinación de proteína por Bradford.
[sacarosa]
g/L Abs 595nm Media Concentración
(g/mL) Concentración (mg/L)
1 0.262 0.285 0.2735 14.9889 1.4988

Tabla 2. Reporta absorbancia a 575nm para determinar azúcares reductores presentes por el método de DNS (1 mL de...