Tinción Con Colorante De Wright

 TINCIÓN CON COLORANTE DE WRIGHT

Fundamento
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la
sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y
tamaño de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de
coloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica depende
en gran parte de la calidad del extendidoy la coloración.

Materiales
Colorante de Wright
Frasco gotero.
Solución amortiguada tamponada

Procedimiento
1. Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20 minutos.

2. Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colorante de Wright, dejándolo por espacio de 5 minutos.

3.
4. Posteriormente se añade solución amortiguada tamponadaen partes iguales hasta obtener un brillo metálico, dejando 6 minutos adicionales.

5. Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.

6. Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa la calidad de la coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite de inmersión y se enfoca a un aumentode 100x.
La forma de los glóbulos rojos se examinará detenidamente observando además del color (cantidad de hemoglobina), presencia de plaquetas, su agrupación y distribución.

Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glóbulos blancos en 100 células, para lo cual se deberá conocer las diferencias entre neutrófilos, eosinófilos, linfocitos y monocitos.






 RECUENTOLEUCOCITARIO


La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3 (milímetro cúbico).

Equipos
- Microscopio.
- Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).
Materiales y reactivos requeridos
Pipeta de glóbulos blancos (DeThoma) o pipeta automática (de 0 a 100 mL).
1 tubo de goma
Bombilla para aspirar.
Diluyente de glóbulos blancos: Solución de Turk al 1%.
Contador manual (Sólo si fuera necesario).
Papel filtro.

Procedimiento
Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos
hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta conpapel absorbente.
Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).
Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador automático por 2 ó 3 minutos.
Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.
Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luegocolocar una gota pequeña de esta solución en la cámara.
Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.
Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 mL (0,02 mL) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de solución de Turk (aquítenemos una dilución 1:20).




LECTURA

La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la figura.
Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se
deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea
horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos, adheridos a la línea horizontalinferior y vertical interior.

Resultados
Nº de leucocitos x mm3 = leucocitos contados en 4 campos
altura x dilución x área
Reemplazando = leucocitos contados en 4 campos
1/10 x 1/20 x 4
= leucocitos contados en 4 campos
4/200
= X/1 = Nº leucocitos contados x 50
4/200

Valores de referencia
5000 - 10 000 leucocitos / mm3





 LEUCOGRAMA
Los leucocitos de...