Tinciones Gram Positivo y Negativo

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Universidad Autónoma de Chile

Facultad de salud

Obstetricia y Puericultura

Aislamiento de Gram

positivos y negativos.

Integrantes: • Fabiola Molina

• Elizabeth Núñez

• Giselle Salas

• Daniela Siede

Docente: Dra. Katherine García Jara

Fecha práctico: 21 y 28 de Septiembre

Índice.

•Introducción………………………………………………………1

• Materiales y métodos……………………………………………3

• Resultados………………………………………………………. 6

• Discusiones………………………………………………………9

• Conclusiones y recomendaciones……………………………. 11

• Bibliografía………………………………………………………. 12

Introducción.

La tinción de Gram o coloración de Gram es uno de los tipos de tinción diferencial más importante y empleadoen microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo Danes Christian Gram. Las bacterias tratadas por el método Gram se clasifican en dos grupos: Gram positivas; que retienen el cristal violeta y Gram negativas que pierden el cristal violeta y se tiñen son safranina apareciendo un color rojizo. La causa de que con este procedimiento unas bacterias secoloreen violeta y otras en rojo se debe a diferencias en la estructura de las bacterias, específicamente en la pared celular y componentes.

Gram positivos.

Son dos las especies más importantes, Staphylococcus y Streptococcus.

Staphylococcus es coco en forma de racimo que se puede observar en medio líquido por turbidez y en medio solido por cepas aisladas que forman colonias, en susrequerimientos nutricionales no son exigentes y en requerimientos de oxígeno es aerobio facultativo. Se determinan gracias a las siguientes pruebas bioquímicas:

• Prueba de catalasa: permite separar la catalasa + (Micrococacceae) de la catalasa – (Streptococcus y Enterococcus).

• Prueba de la coagulasa: permite separar Staphylococcus Aureus (coagulasa +) de las otras especies de Staphylococcus(coagulasa -)

• Presencia de la desoxirribonucleasa: permite separar Staphylococcus Aureus, que es la única especie de este género que posee DNAsa.

Streptococcus es coco agrupado en forma de cadena en el cual sus requerimientos nutricionales son más exigentes utilizando por ejemplo el agar en sangre y en sus requerimientos de oxígeno son aerobios facultativos, catalasa negativo. La prueba debioquímica que se utiliza es la hemólisis que se trata de observar el efecto que tiene la cepa sobre el agar sangre.

Gram negativos.

Para el cultivo, aislamiento e identificación de bacilos Gram negativos se utilizan distintos medios: Simples, con pocas sustancias nutritivas; Complejos, con ingredientes de composición química; Diferenciales, con distinta índole de marcador de pH y Selectivosy diferenciales, con lactosa-rojo-fenol para inhibir desarrollo de Gram +. Los agares más utilizados son:

• Agar MacConckey: utilizado para bacterias de fácil desarrollo aerobios y anaerobios facultativos y las que utilizan o no lactosa. Poseen peptonas y mezcla de sales biliares.

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• Agar E.M.B: utilizado para bacterias con rápido desarrollo y escazas exigenciasnutricionales diferenciando organismo que pueden o no utilizar lactosa y sacarosa.

• Tubos con citrato de Simmons: diferencia enterobacterias en base al uso de citrato como fuente de carbono y energía.

• Agar TSI: diferencia enterobacterias en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y producción de ácido sulfhídrico.

• Agar LIA: utilizado para diferenciar especialmente la Salmonella spp.basada en la decarboxilación y desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.

• Medio MIO: utilizado para la identificación de enterobacterias en base a su movilidad, actividad de ornitina y producción de indol. Es un medio altamente nutritivo que presenta especialmente extracto de levadura, peptona y tripteína.

• Medio MR-VP: utilizado para diferencias...