Traduccion De Mutagenesis

Introducción
El aislamiento de DNA es una técnica fundamental en biología molecular. El aislamiento de DNA de alto peso molecular tiene una gran importancia con el aumento de la demanda para la huella dactilar de ADN, los fragmentos de restricción polimorfismo de longitud (RFLP), la construcción de bibliotecas de secuenciación genómica o de PCR y los laboratorios de análisis de investigación eindustria . También, la población de ADN, y en el análisis de la estructura del genoma y la expresión génica. la cantidad, la calidad y la integridad del ADN afectará directamente a los resultados. El DNA constituye un pequeño porcentaje del material de célula y generalmente se localiza en una parte definida de células, en el DNA de las células procariotas se localiza en el nucleoide que no estáseparado del resto del citoplasma de la célula por una membrana., en células eucariotas, la mayor parte de DNA se localizan en el núcleo, un orgánulo que está separado del citoplasma por una membrana. El núcleo contiene alrededor de 90% del ADN celular total, el ADN restante se encuentra en otros orgánulos tales comocloroplastos, mitocondria, o cinetocoros. En los virus y bacteriófagos, el ADN estáencapsulado por una capa de proteína, y constituye entre el 30 y el 50 por ciento de la masa total del virión. En células procariotas y eucariotas, el ADN constituye sólo alrededor del 1% de la masa total de la célula. La composición aproximada de adivinadoras rápidamente células de E. coli y células humanas.

no hay ninguna dificultad en separiting ADN de moléculas pequeñas ya que el pesomolecular de ADN es muy grande. en consecuencia, los principales componentes celulares que tienen que ser removidos durante la purificación de ADN y ARN arerotein, requerimientos generales de insolación ADN eficaz son:
* el método debe producir ADN sin contamonants principales, proteínas y ARN.
El método debe ser eficiente, la mayoría del ADN celular debe ser aislado y purificado que también debe serno selectivo;. Todas las especies de ADN en las células debe ser igual eficiencia purifiedwith.
* El método no debe alterar física o químicamente las moléculas de ADN.
* El ADN obtenido debe ser de alto peso molecular y de la pizca pocas roturas de cadena sencilla.
* el método debe ser relativamente rápido y bastante simple que no va a tomar mucho tiempo o esfuerzo para preparar ADN es sólo elcomienzo de un experimento y no un fin en sí mismo.
* existen varios métodos para el aislamiento de ADN que, en general, fuifill la mayoría de los requerimientos mencionados anteriormente. todos los métodos implican cuatro pasos esenciales:
rotura celular
eliminación de las proteínas y el ARN
concentración de ADN
determinación de la pureza y cantidad de ADN
dos de los obstáculos más comunespara la obtención de un alto rendimiento de ADN de alta peso molecular son cizallamiento hydrodymamic y la degradación del ADN inespecífico por DNases-. Para evitar estos problemas, se debn tomar algunas precauciones generales. Todas las soluciones deben contener inhibidores DNasas y toda la vajilla de vidrio, puntas de plástico, tubos de centrífuga y buffesr debe ser esterilizado.
el método derotura celular utilizada debe evitar fuerzas fuertes que comparten el ADN,. ADN, en solución,, siempre deben pipetearse lentamente con pipetas de diámetro ancho (alrededor de 3 a 4 nm de diámetro de orificio). la punta de la pipeteado siempre debe estar inmerso en el líquido al pipetear ADN. la solución de ADN no se debe permitir a correr por el lado de un tubérculo ni debe agitarse vigorosamente,o vortex .. el uso de la biología de primer grado molecular o reactivos químicos ultra puros es muy recomendable.
cada tarea de purificación de ADN debe comenzar con una planificación cuidadosa de la cantidad de ADN requerida. La preparación de una biblioteca genómica requiere de 100 a 300 miligramos de ADN de alto peso molecular (más de 1000000 pb de longitud), esencialmente carentes de...