Traduccion

Insolación activa de la mitocondria de frutos de tomate

Abstracto. Un método mejorado para aislar mitocondrias de frutos de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) esta descrito. La fruta es enfriada, y los tejidos de la pared de la fruta cortada a mano en rebanadas muy delgadas con una navaja de afeitar mientras se sumerge en un tapón que contiene 0.4 M albumina 50 mM tris-HCl, pH 7.6. El pHes monitoreado y guardado dentro del rango de 7.0 a 7.2 por adición gota a gota de 1N KOH durante el corte. El tejido es colado a través de 8 capas de tela y centrifugado a 2000 X g por 15 minutos. La parte superior es entonces centrifugada a 11000 X g por 20 minutos, y el sedimento es lavado una vez con un medio que contiene sacarosa 0.4 M, 10 mM KCl, 1 mM MgCl2, 10 mM KH2PO4 y albumina desuero bovino (0.5mg por ml), pH 7.2. Los estudios de microscopia electrónica demuestran que este método mantiene relativamente intactas las mitocondrias; ellas tienen un mayor control respiratorio que lo reportado por otros trabajos. El método fue también exitoso en frutas de cantalupo y en melón.
Para mayores estudios de frutas madurando y el rol del etileno, las preparaciones de mitocondriasaisladas fueron diseñadas las cuales tendrán un alto alto grado de control respiratorio por ADP (adenosina di fosfato) buenas relaciones de ADP/O en relación con el radio limite generalmente aceptado, y un alto grado de homogenicidad con un cercano parecido entre la estructura fina de la mitocondria aislada y esas con sus secciones tisulares intactas. Varias técnicas para aislar mitocondrias defrutas han sido reportadas (3, 7, 12, 14,21). Los factores en la técnica de aislamiento que causan las mayores dificultades con los tejidos de las plantas han sido los contenidos de substancias inhibidoras (10,15) y los efectos de lesiones mecánicas (14). Siguiendo el ejemplo de Spencer y Wildman (19) para la preparación de fracciones de cloroplastos, nosotros buscamos desarrollar una técnica paraaislar mitocondrias de un jitomate el cual daría las mas activas mitocondrias alcanzables
Materiales y métodos
Frutas de tomate maduro (Lycopersicon esculentum Mill) fueron cosechadas de plantas de invernadero de edad conocida como en el método de Lyon and Pratt (17). Las frutas fueron lavadas con agua destilada y enfriado de 0 a 4oC en oscuridad de 1 a 4 horas antes de procesar: todos los pasossiguientes se llevaron acabo a esta temperatura. Las futas enfriadas fueron cortadas en dos o mas piezas, y las semillas y el muy acido gelatinoso material placentario fueron cuidadosamente y completamente removidos. Porciones de los tejidos de paredes exteriores y radiales (60g) fueron lavados con buffer y buffer inmerso, donde fueron cortados a mano en delgadas rebanadas con una navaja de aceroinoxidable. El buffer se basó en un usado por Lance et al. (14), consistente de 0.4M de sacarosa, 4Mm cistina, 2mM MgCl2, 10mM KCl, 8mM EDTA, 50mM tris-
HCl y 0.5 mg por ml de BSA (albumina de surero bovino, fracción V, no esterificado de ácidos grasos pobres) a pH 7.6. Un rango de pH de 7.0 a 7.2 fue mantenido a lo largo del aislamiento con adición gota a gota de 1n de KOH. La suspensión setenso a través de 8 capas de estopa, y el proceso de aislamiento fue completo y resumido en figura 1, notar que la composición del buffer fue cambiada en el paso III. Las preparaciones se hicieron con un Waring Blendor (operado a alta velocidad por 15 seg) y con un mortero moler (7) fue comparado con esos hechos por corte de la pulpa con navaja; otras condiciones de estos aislamientos semantuvieron sin cambios.
La actividad oxidativa y el contenido de proteínas de la suspensión de mitocondrias (0.05-0.4 ml) fueron maceradas por los métodos de Biale et al. (2). Los ácidos orgánicos, albumina suero de bovino, y polivinilpirrolidona (PVP) fue obtenido de la corporación de California por investigación bioquímica o la corporación nutricional bioquímica. ADP y ATP fueron obtenidos de la...