Virologia

PRACTICA 2
Tinción de Gram

Introducción
Las bacterias son incoloras y se observan con dificultad al microscopio óptico. Los cocos y los bacilos se pueden identificar por su forma, agrupación ypor la afinidad a los colorantes utilizados en la tinción de Gram. Las bacterias Gram positivas retienen el color azul violeta y las bacterias Gram negativas el color rojo pálido. En general latinción de Gram no es aplicable a otros microorganismos como protozoos y hongos, exceptuando a las levaduras que se tiñen como Gram positivas.

Objetivos
1. Clasificar algunas especies bacterianas enGram positivas o Gram negativas de acuerdo a esta tinción.
Materiales de laboratorio por equipo
1 Asa bacteriológica de aro Fucsina
1 Microscopio Cristal violeta
2 Mecheros Lugol
6 Portaobjetosy cubreobjetos Alcohol-cetona
Cultivos bacterianos Papel para lente
Aceite de inmersión Pinzas para tubo de ensaye
Cronómetro
Material del equipo
Cerillos
Colores
Marcador indeleble o lápizgraso
Cloro
Franela


Actividad de la práctica
Preparación del frotis
Se realizará el mismo procedimiento de la práctica 2

Fijación del frotis
Se realizará el mismo procedimiento de lapráctica 2

Tinción diferencial de Gram.
1. Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto.
2. Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destiladapara eliminar el exceso de colorante.
3. Sacudir un poco y dejar secar, cubrir el frotis con dos gotas de lugol por 30 segundos.
4. Repetir el paso 2
5. Inclinar el portaobjeto y aplicar gota a gotael decolorante dejando que escurra hasta que no fluya más tintura.
6. inmediatamente repetir el paso 2.
7. aplicar dos gotas de safranina durante 30 segundos.
8. repetir el paso 2, eliminarcuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel y dejar secar al aire.
9. observar al microscopio.

Resultados.
 Reportar las observaciones de forma, agrupación color y tamaño relativo tal...