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ELECTROFORESIS BASICA
Ref.ELECBASICA (4 prácticas)
1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO
El objetivo de este experimento es introducir a los alumnos en el conocimiento de la teoría
electroforética y familiarizarse con los procedimientos implicados en la electroforesis en gel
de agarosa para separar moléculas biológicas.
En este caso se utilizarán colorantes que simularán fragmentos de ADN haciendo másvistoso el gel.
2. INTRODUCCION
La electroforesis en gel de agarosa es un procedimiento utilizado en varias áreas de la
Biotecnología, es un procedimiento analítico utilizado en laboratorios de investigación,
biomédicos y forenses. De los existentes tipos de electroforesis, la electroforesis en gel de
agarosa es el método más común y más utilizado. Es un método de separación
frecuentementeutilizado para analizar fragmentos de ADN generados por enzimas de
restricción, PCR, etc , y es un método analítico conveniente para determinar su tamaño en
un rango de 500-30.000 pares de bases. También puede ser utilizado para separar otras
biomoléculas como colorantes, ARN y proteínas.
Existen algunos tipos de electroforesis en gel de agarosa pero la electroforesis horizontal es
el másutilizado para separar moléculas de ADN en agarosa. Otros tipos como la
electroforesis vertical se utiliza para separar proteínas y utiliza geles de poliacrilamida.
El aparato de electroforesis horizontal es esencialmente una caja con electrodos en cada
extremo, estos electrodos son de platino ya que tiene una conductividad eléctrica muy
buena, debido a que los electrodos de platino son caros yfrágiles se debe tener cuidado
cuando se manejan equipos de electroforesis.
El medio de separación es un gel de agarosa, la agarosa es un polisacárido derivado del agar.
Originario de las algas, la agarosa es altamente purificada para eliminar todas las impurezas.
Se extrae de la misma alga que se utiliza para obtener el agar utilizado en microbiología y
del utilizado en alimentación. Es unasustancia no tóxica pero no debe ser ingerido.
El gel se realiza disolviendo la agarosa en un tampón llevado a ebullición. La solución es
luego enfriada aproximadamente a 55ºC y se añade al molde para realizar el gel. Un peine
con pocillos es colocado en el gel para que forme los pocillos donde se sembrarán las
muestras.
Después que el gel ha solidificado, el gel se coloca en la unidad deelectroforesis y se
sumerge con un tampón adecuado para llevar a cabo la electroforesis. La unidad dispone de
un electrodo positivo en un extremo y un electrodo negativo en el otro extremo. Las
muestras se preparan con un tampón de carga que contiene glicerol para darles densidad y de
esta forma se mantienen en el pocillo sin salirse. Las muestra se siembra en los pocillos con
una micropipeta.Una fuente de corriente es conectada al aparato de electroforesis y se genera una corriente
eléctrica. Las moléculas cargadas de la muestra entrarán en el gel a través de la pared del
pocillo de siembra. Las moléculas con una carga negativa migraran hacia el electrodo

positivo (ánodo) mientras que las moléculas con una carga positiva migrarán al electrodo
negativo (cátodo). El tampón sirvecomo conductor de la electricidad y controla el pH, lo
cual es importante para la estabilidad de las moléculas biológicas. Como el ADN tiene una
carga negativa a pH neutro migrará a través del gel hacia el electrodo positivo durante la
electroforesis.
Si la electroforesis se realiza con muestras de colorantes que simulen fragmentos de ADN, la
migración de varias moléculas puede servisualizada directamente en el gel durante la
electroforesis y no requiere una tinción posterior del gel. No obstante, las moléculas
pequeñas de colorante pueden ser susceptibles de difusión fuera del gel, de este modo se
debe vigilar cuando se produce la separación completa de los colorantes.
El gel de agarosa contiene poros microscópicos que actúa como un tamiz molecular
separando las moléculas...