ANTIGLOBULINA HUMANA

REACTIVO ANTIGLOBULINA HUMANA

(Prueba de Coombs directa)
El suero antiglobulina humana se obtiene inyectando animales mamíferos, generalmente conejos, con globulinas humanas purificadas siguiendo un protocolo estándar de inmunización. De acuerdo con este protocolo se prueba el suero de los conejos y se escogen los que han respondido mejor a la inmunización. Se obtiene sangre total de losmismos (no es imprescindible sacrificarlos) y se hace una mezcla de plasmas que se procesa para obtener un reactivo especifico que será capaz de detectar globulinas humanas, especialmente gamma globulinas y componentes del complemento. La mezcla indicada se diluye con una solución tampón (pH aprox. de 7) que contiene una pequeña cantidad de albúmina bovina; se le añade un 0,1 % de azida sódica (N3Na)como conservante. Para evitar errores en la utilización del reactivo obtenido, que es incoloro, puede adicionarse un colorante verde.
La prueba de la antiglobulina humana permite detectar e identificar inmunoglobulinas y/o componentes del complemento unidos a hematíes, ya que, añadido a hematíes sensibilizados producirá su aglutinación a condición de que dichos hematíes hayan sido lavados a fondocon suero salino fisiológico para eliminar las proteínas plasmáticas que no estén unidas específicamente a los mismos (Fig. 8).
 


Figura 8. Mecanismo de acción del reactivo antiglobulina humana
 
Prueba de antiglobulina directa
Detecta loa anticuerpos o componentes del complemento fijados in vivo en los hematíes de un paciente. Por ello, podemos aplicar dicha prueba al estudio de la enfermedadhemolítica del recién nacido y de las anemias hemolíticas, ya sean autoinmunes o inducidas por fármacos y de las reacciones transfusionales (Tabla I)
 
PRUEBA DIRECTA
·        Enfermedad hemolítica del recién nacido
·        Anemia hemolítica por autoanticuerpos
·        Anemia hemolítica debido a fármacos
·        Investigación de reacciones transfusionales
PRUEBAS INDIRECTA
·        Investigaciónde anticuerpos
·        Pruebas cruzadas
·        Fenotipos eritrocitarios

Tabla I. Aplicaciones de la técnica antiglobulina

 
Prueba de antiglobulina indirecta
Detecta los anticuerpos o los componentes del complemento fijados in vitro a los hematíes durante un tiempo de incubación en el laboratorio. Tiene aplicación en el estudio de anticuerpos en un suero problema a través de hematíes decomposición antigénica conocida (hematíes de escrutinio, paneles de hematíes, etc.), determinación de antígenos eritrocitarios a través de antisueros específicos y, por último, en las pruebas de compatibilidad pretransfusional (Tabla l).
El reactivo antiglobulina que se utiliza básicamente en todas las aplicaciones indicadas es un suero poliespecífico que contiene principalmente anti-IgG yanti-componente C3d del complemento, pudiendo contener además anticuerpos de otras especificidades: anti IgM, anti-IgA, anti-C3b, etc., pero no es conveniente que contenga anti-C4, ya que dicha especificidad no sólo carece de significado para el diagnóstico, sino que los resultados positivos debidos a la misma pueden confundir por tratarse de positivos falsos.
En una prueba de antiglobulina directa positivacon el suero poliespecífico, puede tener interés investigar, mediante los sueros antiglobulina monoespecíficos, el tipo de anticuerpo unido a los hematíes. Siempre que en los hematíes se detecte algún anticuerpo fijado, se puede separar mediante un proceso de elución y proceder a su estudio. Si únicamente están fijados componentes del complemento, no se puede efectuar ninguna elución pero elloconstituye un dato útil para el diagnóstico (Tabla 11).
 
§         POLIESPECÍFICO
          Anti-IgG + Anti-componentes del complemento
§         MONOESPECÍFICO
          Anti-IgG
          Anti-componentes del complemento

Tabla II. Reactivo antiglobulina

 
Los diversos sueros antiglobulina inmunoespecíficos se obtienen de modo análogo a los poliespecíficos, pero se utilizan las distintas...