coloracion gram


GUIA 1
MORFOLOGIA BACTERIANA
COLORACIÓN DE GRAM

OBJETIVOS
Determinar la reacción y morfología de bacterias provenientes de colonias aisladas.
Diferenciar las bacterias según su reacción al Gram
Aplicar al examen directo de las muestras clínicas
Establecer el control de calidad de las muestras clínicas

MATERIALES
a) Portaobjetos con frotis bacterianos procedentes de cultivospreviamente preparado de
Cocos Gram positivos en cadena-agrupación irregular-parejas, Bacilos Gram positivos provenientes de cultivos
Bacilos Gram negativos, provenientes de cultivos.
b) Portaobjetos con frotis bacterianos, coloración de Gram directa.
c) Colorantes:
a)Solución de cristal violetaal1%
b)Solución de safranina al0.5%
c) Lugol
d) Alcohol-acetona (1:1)
d) Microscopios y aceitede inmersión
e) Papel de filtro.

1. INTRODUCCIÓN
La coloración de Gram ha constituido, desde los albores de la Bacteriología, un elemento fundamental para la taxonomía e identificación de las bacterias.
Luego del descubrimiento casual realizado por el investigador danés Cristian Gram en 1884, pasaron muchos años durante los cuales se efectuaron las más variada especulaciones sobre elmecanismo de esta coloración. Resultaba indudable, sin embargo, su practicidad a los fines de la identificación.
Es el método más utilizado tanto en Microbiología como en medicina, ya que puede suministrar información de insuperable valor, tanto por su rapidez como por la exactitud.
Adecuadamente interpretada, no sólo puede darnos correcta información anticipada sobre el cultivo, sino que nosbrinda datos adicionales que no suministra el cultivo.
Hace posible un rápido diagnóstico bacteriológico; requiere equipos y elementos mínimos y bajo costo.
En cuanto a limitación, la identificación de la bacteria es sólo presuntiva y debe ser confirmada o corregida por los cultivos.

1.1 FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE GRAM
El conocimiento de la pared celular bacteriana, tanto en su estadofisiológico como su composición molecular, demostraron que la coloración de Gram distingue dos grupos de bacterias:
- Las bacterias Gram positivas: presentan una gruesa capa de Peptidoglicano como estructura fundamental sobre la membrana citoplasmática.
- Las bacterias Gram negativas: poseen una delgada capa de Peptidoglicano a la que se superpone una capa denominada Membrana externa,constituida por Fosfolípidos, Proteínas y Lipopolisacáridos.
La diferencia de ambos grupos es de gran importancia taxonómica. El comportamiento como patógenos y la sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente.
1.2 PROCEDIMIENTO: RESULTADOS



1.3 INTERPRETACIÓN
1.3.1 Coloración de Gram en bacterias: En relación con las bacterias, la coloración de Graminforma:
Morfología
Características de agrupación
Propiedades de tinción


1.3.2 Identificación bacteriana parcial
Importante para información de carácter urgente
Permite la exclusión de bacterias y confirma la existencia de otras
De gran utilidad para el control de calidad de muestras de Esputo y orina par detectar contaminación

1.3.3 Identificación de bacterias definitiva
Aun cuandopueden ocurrir errores ocasionales la apariencia de ciertas bacterias en determinadas disposición son características suficientes par que no sea necesario el cultivo para confirmarlo
LCR- Absceso de partes blandas- Exudado uretral- Líquidos estériles- Heridas y quemaduras- Orina no centrifugada

1.3.4 Confirmación de cultivo
Después de analizar la apariencia morfológica-metabólica de lascolonias en el cultivo, es necesario comprobar la morfología por medio de la coloración de Gram, que en estos casos sería denominada INDIRECTA

1.3.5 Evaluación de especímenes clínicos

En ciertos órganos, en especial en los tractos respiratorios y urinario, el diagnóstico se dificulta por la presencia de flora normal en la puerta de salida, que contamina el espécimen enviado para análisis...