Cultivo Cito 2015

Cultivo In-vitro de tejido animal.
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Marisa Gonsalves
María Sol Gonzalez
Erwin Figueras
Rossana Lezcano

Cultivo in/vitro
Conjunto de técnicas que permiten el
mantenimiento “in vitro” de células provenientes
de un órgano o tejido, normal o tumoral, en
medio de cultivo de composición química
definida y en condiciones de temperatura, pH,
asepsia, aireación y humedad controlada;
manteniendoasí al máximo sus propiedades y
funciones “in vivo”.

• Esta técnica surge en el siglo XIX para el estudio del
comportamiento de células animales libre de las variaciones
sistémicas ocurridas dentro del organismo y bajo el estrés de
un experimento.
• Células que se suelen utilizar en cultivos
Epiteliales
Tejido conjuntivo
Tejido muscular
Tejido nervioso
Sangre y tejidos linfoides
Células madreembrionarias
Cultvo de células HeLa,  obtenida el
8 de febrero de 1951  

Tipos de cultivo

• Explante primario
• Cultivos Celulares: Primario (en monocapa, en
suspensión), Subcultivo y Líneas celulares.
• Cultivos Histotípicos y Organotípicos

1) Explante primario
Se coloca un fragmento de
tejido o de órgano en la
interfase sólido-líquido de un
soporte de vidrio o de plástico.
Las células seadhieren a la
superficie y las células de la
periferia del explante pueden
migrar y proliferar por la
superficie del soporte.

2) Cultivos celulares
2-1) Cultivo celular primario:
Es el tipo de cultivo más
utilizado. Se puede obtener
a partir de explantes
primarios o de células
disgregadas. La disgregación
celular se realiza por
métodos enzimáticos,
químicos o mecánicos.

2-1) Cultivo celularprimario
• Cuando las células ocupan toda la superficie
disponible se dice que han alcanzado la
confluencia. En esta etapa, las células
establecen contactos entre ellas que inhiben
su proliferación y el crecimiento se detiene.
Entonces hay que transplantar las células a un
nuevo soporte. Esta operación se denomina
subcultivo o pase.

Tipos de cultivo celular primario:
• Cultivos en suspensión: lascélulas se encuentran
dispersas en el medio de cultivo, su crecimiento
no depende del anclaje a un sustrato. Este tipo de
cultivo se utiliza en células hematopoyéticas,
células madres, líneas celulares transformadas y
células tumorales
• Cultivo en Monocapa: las células crecen adheridas
sobre un soporte sólido (plástico o vidrio) para su
proliferación. Este método es utilizado para la
mayoría de lascélulas. Una vez que alcanzan las
paredes del soporte cesa su crecimiento.

2-2) Subcultivos y líneas celulares.
• Las líneas celulares son cultivos sucesivos que se
obtienen cuando las células del cultivo primario,
en monocapa o en suspensión, se pasan a un
nuevo frasco de cultivo.
• Con esta técnica aumenta el número de células
obtenidas, predominan los tipos celulares que
tienen mayor tasa decrecimiento, la población
celular se hace uniforme y homogénea, sus
características se conservan durante las sucesivas
generaciones o de forma indefinida si se
conservan en nitrógeno líquido.

Transformación

Es el resultado de un cambio
genotípico que hace que algunas
células (como las células de
roedores y las células tumorales)
eviten la senescencia y den lugar
a líneas celulares continuas, quecrecen indefinidamente.
Estas células pueden surgir de
forma espontánea (exposición a
radiaciones ionizantes o a
carcinógenos químicos) o
inducida (infección vírica o
transfección de ADN).
Micrografía electrónica de células
HeLa recién divididas

Transformación:

Las células transformadas:
-Son inmortales: crecen
indefinidamente
-Su crecimiento es aberrante
-Se pierde la inhibición por contacto,la limitación de la densidad celular
durante la proliferación y la
dependencia del anclaje.
-Son malignas: invaden tejidos y dan
lugar al crecimiento de tumores.
-Son genéticamente inestables: son
heteroploides y presentan
aberraciones cromosómicas.
Células HeLa en mitosis vistas
al microscopio electrónico

3) Cultivos histotípicos y organotípicos.
•Cultivos histotípicos: Son de un solo tipo...