Estudio comparativo de técnicas sulfato de amonio, ácido caprílico y deae para purificación de inmunoglobulina-g en líquido ascítico de ratón.

Estudio comparativo de técnicas sulfato de amonio, ácido caprílico y DEAE para purificación de Inmunoglobulina-G en líquido ascítico de raton
paulina soto

Resumen

Las inmunoglobulinas se encuentran distribuidas en todos los fluidos orgánicos según la economía de los vertebrados y en las membranas de los linfocitos B y células plasmáticas. Las cantidades relativas de cada una de las clasesde inmunoglobulinas en los diferentes compartimentos del organismo son muy diferentes. La inmunoglobulina G, estudiada en este trabajo, es la más abundante (80%) y predominante en el líquido ascitico (ratón) [1]. Se basó este estudio en la purificación de esta molécula debido a su vital importancia en la defensa del organismo, al tener la capacidad de identificar y colaborar en la destrucción deantígenos extraños con una gran afinidad brindando beneficios en la parte investigativa y utilidad diagnóstica. Se utilizaron y compararon diferentes métodos para su obtención, como: sulfato de amonio, ácido caprílico y DEAE. Se cuantificaron las proteínas totales mediante el método de Bradford y se obtuvo la porción de las IgG mediante la técnica inmunoenzimática ELISA directo. Finalmente, serealizó un SDS-PAGE tris/glicina y para verificar la presencia de estas IgG, se realizaron técnicas inmuno-detectoras como el Western Blot y Dot Blot logrando un certero resultado.

Introducción

Las inmunoglobulinas son glicoproteínas plasmáticas producidas por el sistema inmune en respuesta a la presencia de sustancias extrañas potencialmente dañinas que sugieran algún tipo de amenaza para elorganismo. Estas sustancias pueden ser químicos, partículas virales, esporas o toxinas de bacterias [3]. Su estructura viene determinada por cadenas polipeptídicas agrupadas en una o varias unidades estructurales básicas. Cada unidad está compuesta por cuatro de estas cadenas unidas entre sí por puentes disulfuro y otras uniones no covalentes. Los polipéptidos de bajo peso molecular reciben elnombre de cadenas ligeras (que pueden ser de tipo kappa o lambda) y  las de alto peso molecular el nombre de cadenas pesadas, que definen las clases de inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgM, IgD e IgE) [2-6]. Esta estructura básica puede ser fraccionada en tres fragmentos: Fc, que contiene el alotipo, determina la actividad biológica, la clase y subclase de cadena pesada y dos Fab, que contienen elidiotipo y corresponden al lugar específico donde se une el antígeno.

Las inmunoglobulinas se encuentran distribuidas en todos los fluidos orgánicos de los vertebrados y en las membranas de los linfocitos B y células plasmáticas [5]. Cuando se encuentran insertas en la membrana de los linfocitos actúan como receptores de las señales de activación antigénicas por su capacidad de reconocimiento delantígeno. Sus funciones son: activación del sistema del complemento conduciendo a la lisis del microorganismo; opsonización, es decir, dan una señal a los macrófagos para que destruyan al microorganismo; precipitación de toxinas disueltas en el plasma, así son destruidas por los macrófagos. Tras la unión del antígeno, la inmunoglobulina puede anular su acción por neutralización, precipitación oaglutinación, pero estos fenómenos no son suficientes por sí solos para la destrucción y total eliminación de éstos. Para ello se requiere de la colaboración de los elementos ya mencionados, estos corresponden al sistema del complemento, macrófagos, polimorfonucleares o células NK [3].
La inmunoglobulina G es la más abundante en el plasma y representa más del 70 % de las inmunoglobulinas séricastotales, es monomérica con un peso molecular de 150.000 Daltons [6], lo que la convierte en la inmunoglobulina más pequeña, esto facilita su paso del sistema circulatorio del cuerpo a los tejidos gracias a su capacidad de atravesar activamente las membranas biológicas. Esta propiedad es de gran importancia ya que ésta es la única inmunoglobulina que pasa de la madre al feto a través de la placenta...