Fundamentos de la microscopia

Fundamentos de la microscopia
 Cuando se acerca un observador a un objeto, crece el ángulo visual y ese objeto parece ser mayor. Sin embargo, por debajo de una determinada distancia (unos 25 cm) entre el ojo y el objeto, éste no se ve con claridad. Este límite se debe a la capacidad máxima de deformación del cristalino. Si se sitúa entre le ojo y el objeto un sistema óptico capaz de aumentar elángulo visual, se podrá ver el objeto con mayor amplitud y claridad.
Ese sistema óptico es el MICROSCOPIO. Produce una imagen aumentada de un objeto no visible de forma que sea perceptible por el ojo humano. Se consigue mediante el uso de lentes u otros sistemas.
Esta ampliación de la imagen se puede conseguir de dos formas:
-          ondas luminosas: m. Óptico
-          haz de electrones(é): m. Electrónico
Términos que describen las características ópticas del microscopio
AUMENTO: relación entre el tamaño a simple vista y el tamaño observado con el microscopio (es el número de veces que se ve el tamaño de un objeto por encima de su valor real). En el microscopio compuesto se calcula multiplicando el aumento individual del objetivo por el aumento individual del ocular. Se expresamediante un número seguido del signo “por” (x).
CONTRASTE: diferencia en la absorción de luz entre el objeto estudiado y el medio que lo rodea. Puede aumentarse mediante procedimientos de tinción.
PODER DE RESOLUCIÓN: capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Determina la máxima amplificación útil del microscopio. Depende de la longitud de onda (L) y de la aperturanumérica (AN): cuanto menor es L y/o mayor la AN, mayor es la resolución. La resolución máxima de un microscopio óptico es de 200 nm.
APERTURA NUMÉRICA: capacidad de la lente para juntar los rayos de luz proyectados hacia ella. Determina la eficacia del condensador y del objetivo. La AN depende del índice de refracción del medio que hay entre la muestra y la lente (IR), y del seno de la mitad delángulo del cono de luz que penetra en la lente (sen α).
Si se rellena el espacio existente entre la muestra y el objetivo no con aire, sino con una sustancia de mayor IR (p.e. aceite), se consigue que la mayor parte de los rayos perdidos por los fenómenos ópticos ocasionados en el condensador y en el portaobjetos, se refracten y penetren en el objetivo, con lo que se incrementa la resolución delmicroscopio.
PROFUNDIDAD DE CAMPO: espesor de la preparación enfocada en cualquier momento. Será mayor cuanto menor sea el aumento.
ÁREA DEL CAMPO: es el diámetro de la parte de la preparación que se está viendo. Será mayor cuando menor sea el aumento.


Funcionamiento del microscopio
Los microscopios tienen tres sistemas que facilitan su funcionamiento, que son:
  Sistema mecánico
*SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
* PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
* CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, etc
* REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
* TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima elenfoque.
Es la estructura que sostiene las demás partes del microscopio y le permite moverse. Está formado por el tubo, la platina y el pie.
El tubo contiene en su extremo superior el ocular, y a través de él la luz llega hasta el lente objetivo;
La platina es donde se coloca la muestra que se va a observar; y el pie es la estructura sobre la que se apoya el microscopio.

En el mecánico seincluyen dos tornillos que facilitan el enfoque del objeto observado: el tornillo macrométrico (permite el enfoque global de la muestra) y el tornillo micrométrico (enfoca detalladamente y con precisión cada una de sus partes). Por tanto este sistema de soporte y mecánico del microscopio está compuesto por: tubo del ocular, revólver, platina, pinzas, brazo, base, tornillos macrométrico y...