Genetica molecular-Extracción de DNA


GENÉTICA MOLECULAR.

“EXTRACCION DE DNA.”

Municipio de Bácum Sonora, Block 611 a 14 de octubre de 2013.
I. RESUMEN.
La extracción de ADN es un procedimiento importante de la biología molecular. Por definición, es extraer ADN de cualquier tipo de célula con el propósito de analizarla. Entre las máquinas utilizadas para extraer el ADN están las "Batidoras", las cuales rompen las célulaspara acceder al ADN, el "Frasco de gel", el cual separa las secuencias de ADN en un gel usando una carga eléctrica, y la centrifugación, la cual hace girar una solución de ADN y luego lo precipita (extrayéndolo) utilizando sales. Una vez que se extrae el ADN, su importancia se usa para numerosas funciones.
Existen diferentes técnicas que permiten obtener ácidos nucleicos con alto grado depureza. Las más utilizadas suelen incluir una etapa de ultra centrifugación en gradientes de CsCl o una cromatografía de intercambio iónico.

II. INTRODUCCIÓN.

Hay diferentes técnicas que permiten obtener ácidos nucleicos con alto grado de pureza. Las más utilizadas suelen incluir una etapa de ultra centrifugación en gradientes de CsCl o una cromatografía de intercambio iónico. Sin embargo,muchas aplicaciones de laboratorio no necesitan un grado de pureza tal que justifique incluir estas técnicas en los protocolos de purificación.
Las etapas del procedimiento que se realizan son los siguientes:
Desintegración del tejido y solubilización y homogenización de los componentes celulares.
Precipitación de los ácidos nucleicos y disolución en buffer adecuado.
Homogenización de lamuestra:
El método para desintegrar el tejido deben estar adaptadas las características de este. Para grande volúmenes de tejidos blandos suelen usarse licuadoras parecidas a las domesticas. Aquellos tejidos con células cuya pared celular es resistente requieren condiciones drásticas como huesos o dientes.

Extracción de proteínas y lípidos:
Los ácidos nucleicos son muy solubles en agua debido alfuerte carácter hidrofilico de sus grupos fosfatos. Dentro de una mezcla de solventes no miscibles uno acuoso y otro orgánico no polar, los ácidos nucleicos tendrán a permanecer an la fase acuosa, en tanto que los lípidos y gran parte de las proteínas desnaturalizadas se encontraran en la fase orgánica. En la preparación de ácidos nucleicos, los solventes que se usan más frecuentemente para laextracción de proteínas y lípidos son el fenol y el cloroformo.



Precipitación de ácidos nucleicos:
La precipitación de los ácidos nucleicos permite su purificación y concentración. Se basa en la simultánea neutralización de las cargas negativas y deshidratación de la molécula, lo cual lleva a su precipitación. La presipitacion es un fenómeno reversible y no debe de ser confundido con ladesnaturalización ni con la degradación de los mismos.
III. OBJETIVOS.
Objetivo general:
Extraer ADN de diferentes muestras por métodos físico-químicos.

Objetivos específicos:
Conocer la metodología básica para la extracción de ADN.
Adquirir destreza en la manipulación de diversas muestras biológicas para la extracción de ADN.
Determinar la integridad del ADN por electroforesis en gelde agarosa.
Materiales.
Estuche de disección esterilizado
Charolas para pesar o aluminio
Balanza (mg)
Tubos eppendorf de 1.5-0.2 ml
Gradillas para tubos
Guantes de látex
Vasos de precipitado
Alcohol
Agua destilada y DEPC
Centrifuga
Pistilos
Vortex
Micropipetas
Puntillas para micropipetas
Ultracongelador
Material biológico:
Camarones enteros in vivo de preferencia o fijados enalcohol al 70%
Musculo de camaron fijado en alcohol al 70%


METODOLOGÍA.
1). Selección y toma de muestra
Dependiendo el tipo de interés que deseamos analizar es el origen de la muestra que debemos tomar.
Virus  Pleópodos o branquias Bacterias Hepatopáncreas, branquias o músculo
Las cantidades van desde 100- 150 mg, se pesan en charolas de plásticos limpias, el material debe estar...