Genetica molecular DNA extraccion y cuantificacion

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán
Departamento de Ciencias Biológicas
Sección de Bioquímica y Farmacología Humana

Licenciatura en Bioquímica Diagnóstica
Genética Molecular Laboratorio
Grupo: 2651 Semestre: 2015-lI

Reporte de las prácticas:
2-Aislamiento y purificación de DNA por la técnica de percloratode sodio
3- Extracción de DNA por la técnica de fenol-cloroformo
4- Cuantificación de DNA
5- Electroforesis de DNA

Equipo 7
Gómez Nájera Candy F.



Asesores:
M.en C. Maritere Domínguez Rojas
QFB Nydia B. González Ángeles
QFB Alejandro Gutiérrez García
Fecha de entrega: 23/03/15
RESUMEN

PALABRAS CLAVE
Extracción de DNA, Purificación de DNA, Electroforesis, técnicas de purificación de DNA,INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos constituyen el material genético de los organismos, están encargados del almacenamiento y expresión de la información genética. Existen dos tipos de ácidos nucleicos, química y estructuralmente distintos, el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA); ambos se encuentran en todas las células procariotas, eucariotas y los virus contienen uno deestos.
El DNA como molécula, es una doble hélice que consiste en dos esqueletos helicoidales de azúcar fosfato entrelazados; este último grupo es el que confiere la carga negativa, características ácidas y de solubilidad a la molécula. Las bases heterocíclicas del DNA se proyectan hacia el interior de cada una de las cadenas. La presencia de estas bases, confiere al DNA la propiedad física deabsorber luz, en el espectro Ultravioleta, a una longitud de onda de 260 nm, propiedad utilizada en métodos de identificación y cuantificación espectrofotométrica. Estos pares de bases se apilan a lo largo del eje de la hélice a una distancia de 3-4 A entre ellas. Debido a la longitud de DNA genómico en las células eucariotas, alrededor de 2 metros por célula, es necesaria la compactación, demanera que permita ocupar menos espacio y quepa dentro del núcleo de la célula. Para ello, el DNA se asocia a nucleoproteínas histonas y no histonas para formar la cromatina y dar origen a los cromosomas. [Salazar et al: 2013]
El DNA tiene la capacidad de replicarse, de transcribirse en RNA y su posterior traducción en proteínas. El DNA a menudo contiene códigos de enfermedades que son genéticas,heredadas de padres a hijos. La importancia de su estudio radica actualmente en que los investigadores puedan determinar el rol que juegan los genes en enfermedades complejas como el cáncer. [Bishop et al: 2004]
Por ello, en esta ocasión, se evaluó la capacidad de dos métodos de extracción de DNA que resultan muy utilizados en biología molecular para la obtención de DNA de buena calidad; a partirde una muestra de sangre periférica, en específico de células leucocitarias mediante las técnicas de perclorato de sodio y fenol-cloroformo. Técnicas que presentan principios similares, basados en las propiedades fisicoquímicas del DNA, pero que utilizan reactivos distintos, con características muy diferentes. La utilización de uno u otro método será criterio del investigador, sopesando los pros ycontras de ambas técnicas. Posteriormente se realizó la cuantificación de DNA mediante espectrofotometría, con la absorbancia de la muestra a 260nm y a 280nm. El análisis de DNA se realizó por electroforesis en gel de agarosa, para evaluar la efectividad de ambos métodos.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Tabla 1: Tiempo estimado de extracción por técnica utilizada.
Técnica de extracción
Tiempo estimadode extracción
Perclorato de Sodio
75 minutos
Fenol- Cloroformo
90 minutos

Tabla 2: Cuantificación de DNA extraído por el equipo 7 mediante espectrofotometría en equipo Epoch.

Método de extracción

Lectura 260 nm

Lectura 280 nm

Relación 260/280

Concentración de DNA (ng/µL)

Perclorato

0.693

0.362

1.914

692.869

Fenol-Cloroformo

0.449

0.223

2.01

448.337




Tabla 3: Relación 260/280...