Marcadores Moleculares
Páginas: 5 (1098 palabras)
Publicado: 4 de junio de 2014
Breve descripción de marcadores moleculares y de las categorías y técnicas basadas en la hibridación y en la reacción en cadena de la polimerasa PCR
Los marcadores moleculares o marcadores ADN revelan sitios de variación naturales a nivel de secuencia de ADN . a diferencia de los marcadores controladosd por genes asociados a caracteres morfológicos (fenotipos de fácil identificaciónvisual) las variaciones en los marcadores de ADN no se muestran por si mismas en el fenotipo por que pueden ser diferencias en un solo nucleótido del gen o en un pedazo de ADN repetitivo
Los marcadores moleculares relacionados a una característica especifica son de particular interés porque permiten identificar individuos que contengan esa característica y diferenciarlos de los que no laposean. Es decir dan información sobre la diversidad genética
Un gran número de técnicas moleculares puede ser utilizado para obtener marcadores de diversidad mediante la detección de polimorfismo a nivel de ADN
MARCADORES DETECTADOS POR HIBRIDACION
Dentro de estos se agrupan técnicas que emplean sondas para la detección de los marcadores. Las sondas son fragmentos de ADN, o ARN que contienenel código complementario para una secuencia especifica del genoma
LAS TECNICAS MAS USADAS SON:
%polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP)
%numero variable de repeticiones en tándem (VNTR)
% ADN ships (oligonucleotide arrays)
LOS MARCADORES BASADOS EN LA PCR.
Los marcadores identificados por amplificación del ADN están basados en la reacción en cadena de lapolimerasa. La introducción de esta tecnología permitió nuevas posibilidades para la detección del polimorfismo genético. La selección de la técnica depende del objetivo trazado
Las técnicas moleculares brindan información a diferentes niveles todas tienen limitaciones, entre los factores a considerar están el contenido de la información y el radio múltiple que cada técnica pueda brindar,(número de marcadores que pueden ser generados en una simple reacción
EXTRACCION DEL ADN
La aplicación efectiva de estas técnicas para el análisis del genoma depende en gran medida de la habilidad para extraer el ADN
Uno de los problemas es la composición de la pared celular la cual dificulta el acceso al interior para la extracción de todo su contenido incluyendo el ADN dicha pared se deberomper por acción mecánica pulverizando el tejido después con nitrógeno líquido o hielo seco
Enseguida se deben destruir las membranas celulares de manera que el ADN, acompañado de otros compuestos (proteínas, enzimas, carbohidratos) quede disponible.
La mezcla de tejido así obtenida se agrega a una solución buffer o tampón de extracción en presencia de agentes quelantes, de soluciones de bajas oalta fuerza iónica, y de altas concentraciones DE NaCl. Los agentes quelantes se emplean para proteger el ADN de la acción de encimas nucleasas.
Las altas concentraciones de NaCl se emplean para prevenir la contaminación de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN pudiendo inhibir la actividad de algunas encimas la base para la separación de los polisacáridos de los ácidosnucleicos es su solubilidad diferencial en presencia de altas concentraciones de NaCl.
Final mente ay que separar el ADN de la fase acuosa para lo cual se debe de precipitar el mismo usando un alcohol el cual es selectivo en la precipitación del ADN en presencia de ARN el se remueve adicionando encima RNAasa a la solución
Preparación de soluciones madre
TRIS es un tampón biológico cuyafunción es mantener el PH de la solución constante se prepara a PH de 8.0 se van a preparar 100ml de solución madre de TRIS de concentración 1M
EDTA es un agente quelante de iones metálicos como Ca y Mg inhibe la acción de las nucleasas al no haber cofactores libres para su actividad y así protege al ADN. Se prepara a PH 8.0 se van a preparar 100ml de solución madre EDTA de concentración...
Los marcadores moleculares o marcadores ADN revelan sitios de variación naturales a nivel de secuencia de ADN . a diferencia de los marcadores controladosd por genes asociados a caracteres morfológicos (fenotipos de fácil identificaciónvisual) las variaciones en los marcadores de ADN no se muestran por si mismas en el fenotipo por que pueden ser diferencias en un solo nucleótido del gen o en un pedazo de ADN repetitivo
Los marcadores moleculares relacionados a una característica especifica son de particular interés porque permiten identificar individuos que contengan esa característica y diferenciarlos de los que no laposean. Es decir dan información sobre la diversidad genética
Un gran número de técnicas moleculares puede ser utilizado para obtener marcadores de diversidad mediante la detección de polimorfismo a nivel de ADN
MARCADORES DETECTADOS POR HIBRIDACION
Dentro de estos se agrupan técnicas que emplean sondas para la detección de los marcadores. Las sondas son fragmentos de ADN, o ARN que contienenel código complementario para una secuencia especifica del genoma
LAS TECNICAS MAS USADAS SON:
%polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP)
%numero variable de repeticiones en tándem (VNTR)
% ADN ships (oligonucleotide arrays)
LOS MARCADORES BASADOS EN LA PCR.
Los marcadores identificados por amplificación del ADN están basados en la reacción en cadena de lapolimerasa. La introducción de esta tecnología permitió nuevas posibilidades para la detección del polimorfismo genético. La selección de la técnica depende del objetivo trazado
Las técnicas moleculares brindan información a diferentes niveles todas tienen limitaciones, entre los factores a considerar están el contenido de la información y el radio múltiple que cada técnica pueda brindar,(número de marcadores que pueden ser generados en una simple reacción
EXTRACCION DEL ADN
La aplicación efectiva de estas técnicas para el análisis del genoma depende en gran medida de la habilidad para extraer el ADN
Uno de los problemas es la composición de la pared celular la cual dificulta el acceso al interior para la extracción de todo su contenido incluyendo el ADN dicha pared se deberomper por acción mecánica pulverizando el tejido después con nitrógeno líquido o hielo seco
Enseguida se deben destruir las membranas celulares de manera que el ADN, acompañado de otros compuestos (proteínas, enzimas, carbohidratos) quede disponible.
La mezcla de tejido así obtenida se agrega a una solución buffer o tampón de extracción en presencia de agentes quelantes, de soluciones de bajas oalta fuerza iónica, y de altas concentraciones DE NaCl. Los agentes quelantes se emplean para proteger el ADN de la acción de encimas nucleasas.
Las altas concentraciones de NaCl se emplean para prevenir la contaminación de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN pudiendo inhibir la actividad de algunas encimas la base para la separación de los polisacáridos de los ácidosnucleicos es su solubilidad diferencial en presencia de altas concentraciones de NaCl.
Final mente ay que separar el ADN de la fase acuosa para lo cual se debe de precipitar el mismo usando un alcohol el cual es selectivo en la precipitación del ADN en presencia de ARN el se remueve adicionando encima RNAasa a la solución
Preparación de soluciones madre
TRIS es un tampón biológico cuyafunción es mantener el PH de la solución constante se prepara a PH de 8.0 se van a preparar 100ml de solución madre de TRIS de concentración 1M
EDTA es un agente quelante de iones metálicos como Ca y Mg inhibe la acción de las nucleasas al no haber cofactores libres para su actividad y así protege al ADN. Se prepara a PH 8.0 se van a preparar 100ml de solución madre EDTA de concentración...
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