metodo de sanger
Páginas: 3 (611 palabras)
Publicado: 23 de febrero de 2015
PRÁCTICA N° 1
DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE.
MÉTODO DE SANGER
Sección: 4 2OV1
INTRODUCCIÓN
El método de determinación de aminoácidosterminales y secuenciación de aminoácidos en cadenas peptídicas fue introducido por Frederick Sanger en1955. En este método se emplea e l reactivo 1-fluoro-2,4-dinnitrobenceno (reactivo de Sanger) quereacciona con el grupo NH2-terminal de la Hemoglobina en condiciones ligeramente alcalinas formando un derivado 2,4-dinitrofenilo del polipéptido de color amarillo intenso, la hidrólisis subsecuentedel péptido con el HCl 6N hidroliza todos los enlaces peptídicos, por lo que el derivado amarillo del residuo NH2-terminal puede separarse por cromatografía en papel de los aminoácidos libres.Posteriormente se compara con derivados conocidos de los aminoácidos y, con ello, se identifica el grupo alfa amino terminal de una proteína. En 1958 Sanger ganó el premio nobel de química, por su trabajo desecuenciación de aminoácidos en proteínas y por sus investigaciones en la determinación de secuencias de bases de ácidos nucléicos.
OBJETIVOS
Utilizar el método de Sanger para identificar losaminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina.
RESULTADOS
El DNFB de color amarillo reacciona con los grupos amino-libres de la hemoglobina encondiciones ligeramente alcalinas al adicionar el bicarbonato de sodio (medio alcalino pH = 8) al estar primero en un medio alcalino el grupo amino NH2 se encuentra desprotonado, al agregar el DNFBse genera un momento dipolar debido al F que es electronegativo, el nitrofenilo se adiciona así mismo a la proteína (grupo amino) que tiene un par de electrones libres, liberando al F.
Se adicionoentonces el HCl para que la proteína (hemoglobina) se protonara nuevamente y los e- libres no reaccionaran con el DNFB es decir para liberar el aminoácido que ha reaccionado del resto de la cadena...
DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE.
MÉTODO DE SANGER
Sección: 4 2OV1
INTRODUCCIÓN
El método de determinación de aminoácidosterminales y secuenciación de aminoácidos en cadenas peptídicas fue introducido por Frederick Sanger en1955. En este método se emplea e l reactivo 1-fluoro-2,4-dinnitrobenceno (reactivo de Sanger) quereacciona con el grupo NH2-terminal de la Hemoglobina en condiciones ligeramente alcalinas formando un derivado 2,4-dinitrofenilo del polipéptido de color amarillo intenso, la hidrólisis subsecuentedel péptido con el HCl 6N hidroliza todos los enlaces peptídicos, por lo que el derivado amarillo del residuo NH2-terminal puede separarse por cromatografía en papel de los aminoácidos libres.Posteriormente se compara con derivados conocidos de los aminoácidos y, con ello, se identifica el grupo alfa amino terminal de una proteína. En 1958 Sanger ganó el premio nobel de química, por su trabajo desecuenciación de aminoácidos en proteínas y por sus investigaciones en la determinación de secuencias de bases de ácidos nucléicos.
OBJETIVOS
Utilizar el método de Sanger para identificar losaminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina.
RESULTADOS
El DNFB de color amarillo reacciona con los grupos amino-libres de la hemoglobina encondiciones ligeramente alcalinas al adicionar el bicarbonato de sodio (medio alcalino pH = 8) al estar primero en un medio alcalino el grupo amino NH2 se encuentra desprotonado, al agregar el DNFBse genera un momento dipolar debido al F que es electronegativo, el nitrofenilo se adiciona así mismo a la proteína (grupo amino) que tiene un par de electrones libres, liberando al F.
Se adicionoentonces el HCl para que la proteína (hemoglobina) se protonara nuevamente y los e- libres no reaccionaran con el DNFB es decir para liberar el aminoácido que ha reaccionado del resto de la cadena...
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