Obtencion total de rna de ovocitos

UNIDAD: Iztapalapa.

DIVISIÓN: Ciencias Biológicas y de la Salud (CBS).

GRADO: Licenciatura.

TÍTULO DEL TRABAJO: Expresión génica estadio-específica en el desarrollo embrionario temprano de Mus musculus albinus.

NOMBRE DE LOS PARTICIPANTES: Bonilla Delgado José y Dr. Héctor F. Serrano.

NOMBRE Y FIRMA DEL ASESOR:

Dr. Héctor F. Serrano. Profesor Titular “C”, T.C. Depto. de Cienciasde la Salud.

Expresión génica estadio-específica en el desarrollo embrionario temprano de Mus musculus albinus.
Alumno: Bonilla Delgado José. Asesor: Dr. Héctor F. Serrano. Introducción: La clonación sustractiva, es una herramienta poderosa en Biología Molecular para el aislamiento de genes expresados en una población celular y no en otra. La técnica se basa en un procedimiento conocidocomo: “Driver excess hybridation” en la cual, se cuenta con el ácido nucleico del estadio que se desea comparar (Tracer) y un segundo estadio, que se presume cuenta con toda la población génica del Tracer más aquella que se haya expresado de novo (Driver). La concentración de ácido nucleico del Tracer, debe presentarse en un exceso de alrededor de 10 veces la concentración de ácido nucleico delDriver, esto favorecerá la velocidad de alineamiento durante la hibridación, y por consiguiente, se espera que las poblaciones de ácidos nucleicos que son comunes tanto para el Driver como para el Tracer hibriden eficientemente. Después de la hibridación, los híbridos (DriverTracer) son eliminados, y sólo aquellos ácidos nucleicos de expresión específica del Tracer y no del Driver se amplificarán enuna ronda de amplificación posterior. A este paso se refiere el término “Substracción” (Sagerströn, et al, 1997). Patrones de Expresión génica durante el desarrollo temprano. La transición del control génico materno al control génico embrionario es un proceso esencial para la progresión del desarrollo (Schultz, 1999). La transición del control génico es también llamada activación génica del cigoto(ZGA), y consiste en el reemplazo de los RNA transcritos así como de sus proteínas de expresión materna, como es el caso de la proteína MSY2, por aquellos transcritos necesarios para el metabolismo celular (housekeeping), y por los mRNA transcritos de novo de genes aportados por el genoma paterno, que manifiestan el momento en el cual ocurre la ZGA (Latham, et al, 1991). A menudo, la habilidad dedestruir los transcritos materno-específicos restringe el tiempo de activación, esto se debe, a que, por ejemplo, MSY2 es una de las proteínas más abundantes del ovocito aportando cerca del 2% de las proteínas totales y su permanencia en el huevo fertilizado aumenta el tiempo en el cual se inicia la expresión del genoma embrionario (Schultz, 1993). La ZGA, se puede definir también, como latransformación de un huevo fertilizado en blastómeros totipotenciales capaces de generar cada uno un individuo. En el caso del ratón, esto ocurre en el estadio de dos células, es decir, durante la primera segmentación (Latham et al., 1991). Sin embargo, aunque la mayor parte de la ZGA ocurre durante el estadio de 2 células, existen evidencias que demuestran que la reprogramación comienza a ser evidentedurante el estadio de 1 célula. En éste estadio, el pronucleo masculino es el que presenta una mayor actividad de transcripción, respecto a la que tiene el pronucleo femenino, esto puede deberse, a la expresión preferencial de los promotores carentes de caja TATA

haciendo evidente las diferencias en la forma en que se está procesando la cromatina del pronúcleo masculino en comparación con la delpronúcleo femenino (Ram y Schultz, 1993). Lo anterior, se ha tratado de explicar con base a que el glutatión presente en el ovocito maduro, participa en la reducción de enlaces disulfuro en las Protaminas, facilitando el acceso a elementos de unión cis en el DNA. Además, el pronúcleo masculino presenta una alta concentración de factores de transcripción como: Sp1, Oct-4, Ets-1, entre otros,...