practica 8

PRÁCTICA N° 8
CÉLULA PROCARIOTA-TÉCNICA DE COLORACIÓN BACTERIANA
TINCIÓN DE PARED CELULAR
I. COMPETENCIA
Conoce las diversas técnicas de tinción y el fundamento de las mismas.

II. MATERIALES
Asa de siembra
Microscopio
Porta objetos
Aceite de inmersión
Peseta con agua destilada
Solución salina
Mechero Bunsen
Batería para tinción Gram
MondadientesGuantes
Gorro
Mascarilla

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

PARED CELULAR
Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cápsulas o capas mucosas y externas a la membrana citoplasmática está la pared celular que es una estructura muy rígida y que da forma a la célula. Las paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y la división. Todas las bacterias poseenparedes celulares rígidas que protegen a la célula de explotar en medios de baja presión osmótica.
Composición química de las paredes celulares.- El péptidoglucano proporciona a la pared celular una estructura rígida. Estos grandes
polímeros, están compuestos de tres clases de bloques estructurales: N- Acetil-Glucosamina, Ácido N- Acetil-Murámico y un péptido que consta de cuatro o cincoaminoácidos. Además contiene proteínas con polisacáridos, lipoproteínas y lipopolisacáridos.
Propiedades y Funciones:
Brinda protección y resistencia a la bacteria frente a los posibles cambios de presión osmótica del medio en el que se encuentra y a la acción de ciertos agentes externos.
Presenta Poros que actúan como filtros, permitiendo el pasaje de aguay metabolitos esenciales.
Presentaantígenos de tipo y grupo específicos.
Participa en la división (multiplicación) bacteriana (se invagina junto con la membrana plasmática).
En las bacterias Gram .negativas tiene poder patógeno debido a que presenta endotoxinas (Lípido A).

MÉTODO DE TINCIÓN DE GRAM
A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tinción de Gram es la más utilizada en el diagnósticomicrobiológico.
La tinción de Gram es una tinción diferencial que permite distinguir dos grandes grupos bacterianos: las Gram (+) y las Gram (-).
Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en muestras clínicas. También se emplea como primer paso en la diferenciación bacteriana. El examen con microscopio óptico de preparación con tinción de Gram se emplea de rutina para determinar laforma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esféricas), bacilos (alargadas) y formas espiraladas Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los microorganismos Grampositivos se tiñen de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad
de los bacilos y todos los organismos espira lados se tiñen de rojo y se dice que son Gramnegativos.
Elvalor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una buena orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas y también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico etiológico, en especial para instaurar un tratamiento inicial.
La tinción de Gram requiere cuatro soluciones:
Primer colorante: El cristal violeta es un colorante básico que encontacto con las células bacterianas cargadas negativamente, reaccionan con ellas coloreándolas.
Solución mordiente: El Lugol que fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las células. El ingrediente activo de este compuesto es el I2; El KI simplemente hace soluble el I2 en el agua. El I2entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. Hastaeste momento las células Gram (+) como Gram (-) se encuentran teñidas de color violeta.
Agente decolorante: El alcohol acetona es un solvente orgánico que disuelve la membrana externa de las Gram (-) facilitando la salida del complejo colorante-mordiente. Debemos tomar en cuenta la delgada capa de mureína incapaz de retener este complejo en las Gram (-).

Luego de este tratamiento las...