Precipitacion de proteinas

Precipitacion De Proteinas
OBJETIVOS
Estudiar algunos agentes desnaturalizantes de proteínas.

Introducción
Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija. Hay varios factores que ayudan a ladesnaturalización de las proteínas.1

Por calor:
“Cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas, y se desnaturalizan. Asimismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones débiles y desorganiza la estructura de la proteína, de forma que el interior hidrófobo interacciona con el medio acuoso y seproduce la agregación y precipitación de la proteína desnaturalizada”.1

Isoeléctrica:
“Un aumento de la fuerza iónica del medio también provoca una disminución en el grado de hidratación de los grupos iónicos superficiales de la proteína, ya que estos solutos compiten por el agua y rompen los puentes de hidrógeno o las interacciones electrostáticas, de forma que las moléculas proteicas se agregan yprecipitan. Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero además de afectar a la envoltura acuosa de las proteínas también afectan a la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de las cadenas laterales de los aminoácidos. Esta alteración de la carga superficial de las proteínas elimina las interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provocasu precipitación”.1

Por salación:
“Grandes cantidades de una sal agregada a una solución de proteínas, disminuye la interacción proteína- H2O porque quita la capa de solvatación, y predominará la interacción proteína-proteína y se producirá la precipitación. La concentración salina a la que se produce la precipitación no es igual para cualquier proteína, lo que permite usar ésta propiedad parala separación y purificación de proteínas particulares a partir de mezclas complejas.
Comúnmente se usa sulfato de amonio (NH4)2SO4 para tal fin, a causa de su gran solubilidad. La adición gradual de ésta sal permite el fraccionamiento de una mezcla de proteínas, las cuales son precipitadas pero no desnaturalizadas, entonces un exceso de agua, por encima del punto de precipitación, permitesolubilizar nuevamente las proteínas”.2

>Por disolventes orgánicos:
“Se usan solventes orgánicos en el procesamiento de alimentos cuando se desea solubilizar sustratos, y para desplazar el equilibrio de algunas reacciones enzimáticas al disminuir la concentración de agua del sistema. Las proteínas disueltas en un sistema acuoso sufren cambios en su estructura tridimensional cuando son trasladadas aun sistema con un solvente distinto. Al cambiar una proteína a un sistema con disolventes orgánicos se logra un desdoblamiento o desplegamiento parcial por el rompimiento de las interacciones hidrofóbicas y puentes de H que se mantienen, pero en una estructura distinta de la nativa”.1
“Cuando una proteína se coloca en un solvente de baja constante dieléctrica la atracción entre las partículascargadas sobrepasa a al energía cinética a la que están sujetas por la temperatura del ambiente, y se insolubilizan. Una molécula de proteína en un solvente acuoso logra disolverse mejor si tiene una distribución de las cargas más uniformes a lo largo y ancho de su superficie, y un menor momento dipolo. Los cambios de constante dieléctrica al cambiar de solvente a la proteína modificannecesariamente las fuerza de atracción entre los residuos de las proteínas y esto explica la precipitación que sufren las proteínas cuando se añaden solventes miscibles, como metanol o etanol, a las soluciones acuosas de proteínas porque la atracción entre las partículas cargadas de refuerza”1.

>Por formación de sales:
“En este factor depende si son metales pesados ó ácidos:
-Efecto de metales pesados:...