separando organelos

Experimento Clásico
Separando organelos
En los años 1950 y 1960, los científicos utilizaron dos técnicas para el estudio de los organelos celulares: microscopía y fraccionamiento. Christian de Duve estaba en la vanguardia de fraccionamiento celular. A principios de la década de 1950, utilizó centrifugación para distinguir un nuevo organelo, el lisosoma, a partir de fracciones previamentecaracterizadas: el núcleo, la rica fracción mitocondrial y los microsomas. Poco después, él utilizó la centrifugación de densidad de equilibrio para descubrir otro organelo.

Antecedentes
Las células eucariotas están muy organizadas y compuestas de estructuras celulares conocidas como organelos que realizan funciones específicas. Aunque la microscopía ha permitido a los biólogos descubrir laubicación y el aspecto de distintos organelos, el uso es limitado en el descubrimiento de la función del organelo. Para ello biólogos celulares se han basado en una técnica fraccionamiento de la célula. Aquí, las células se rompen abierto, y los componentes celulares están separados sobre la base de su tamaño, masa y densidad usando una variedad de técnicas de centrifugación. Luego los científicospueden aislar y analizar los componentes celulares de diferentes densidades, llamados fracciones. Usando este método, los biólogos tenían dividida la célula en cuatro fracciones: núcleo, la rica fracción mitocondrial, microcosmos y jugo celular. de Duve fue un bioquímico interesado en lasubicaciones subcelulares de las enzimas metabólicas. Él ya había completado un gran cuerpo de trabajo en el fraccionamiento de las células del hígado, en el cual había determinado la ubicación subcelular de numerosas enzimas. Mediante la ubicación de estas enzimas en fracciones de células específicas, él pudo comenzar a dilucidar la función del organelo. Él señaló que su trabajo se basó en doshipótesis: el "postulado de la homogeneidad bioquímica" y "el postulado de una sola ubicación". En resumen, estas hipótesis proponen que la totalidad de la composición de una población subcelular contendrá las mismas enzimas, y que cada enzima está situado en un sitio discreto dentro de la célula. Armado con estas hipótesis y la poderosa herramienta de centrifugación, de Duve además subdivide la ricafracción mitocondrial. Primero él identificó la luz de la fracción mitocondrial, la cual está compuesta de enzimas hidrolíticas que ahora se sabe que compone el lisosoma. Luego, en una serie de experimentos describe aquí, que él identificó otra discreta fracción subcelular, la cual llamó peroxisoma, dentro de la rica fracción mitocondrial.

El experimento
de Duve estudió la distribución de enzimasen las células de hígado de rata. Gran actividad en la energía del metabolismo, el hígado contiene un número de enzimas útiles para estudiar. Para buscar la presencia de varias enzimas durante el fraccionamiento, se basó en pruebas conocidas, llamadas ensayos de enzimas, para la actividad enzimática. Para conservar la máxima actividad enzimática, él tomó precauciones, las cuales incluían larealización de todas las etapas de fraccionamiento a 0 ° C, porque el calor desnaturaliza la proteína la que podría comprometer la actividad enzimática. de Duve utilizó la centrifugación de lavelocidad zonal para separar los componentes celulares por sucesivas etapas de centrifugación. Él removió hígado de rata y lo rompió separándolo por homogenización. La preparación cruda de células homogeneizadas fueron luego fueron sometidos a relativamente baja velocidad de centrifugación. Este paso inicial separa el núcleo de la célula, el cual recoge como sedimentos en la parte inferior del tubo,...