tema 4

4. Preparación de muestras para
microscopía óptica

4. Preparación de muestras

●

Criterios en las técnicas de preparación

●

Técnicas para luz transmitida

●

Técnicas para luz reflejada

4. Preparación de muestras

El objetivo de la preparación de muestras para
microscopía óptica es
permitir que las estructuras de los materiales se
revelen con suficiente contraste de modo que lascaracterísticas de interés sean descritas, grabadas
y caracterizadas en detalles visibles a una escala
menor que la agudeza visual del ojo humano.
La escala última de observación estará limitada por
la resolución del sistema de imagen del
microscopio.

4. Preparación de muestras

Criterios en las técnicas de preparación
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Asegurar que la muestra a observar es
representativa del material, objeto uorganismo de
procedencia que se desea estudiar.
Hacer que las características de interés sean
accesibles al sistema de imagen del microscopio.
Cuando sea necesario, aumentar el contraste entre
los elementos estructurales de los materiales y el
fondo.

4. Preparación de muestras

Criterios en las técnicas de preparación
●

●

Proporcionar las condiciones suficientes para la
estabilidad de lasmuestras, y suficiente significa
proteger
las
muestras
de
decaimiento,
degradación, corrosión o contaminación dentro de
la escala de tiempo de la observación.
Ajustar la muestra a los requisitos ópticos del
sistema de imagen del microscopio para proveer de
las condiciones óptimas de contraste y resolución,
y evitar artefactos ópticos que pudieran aparecer y
que oscurecerían la imagen o incorporaríanfalsos
detalles.

4. Preparación de muestras

Técnicas de preparación para luz transmitida
●

Las muestras biológicas pueden ser examinadas
en muchos estados como combinación de los
siguientes:
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vivas o muertas

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frescas o preservadas/fijadas

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enteras o en secciones

●

teñidas o sin teñir

●

hidratadas o deshidratadas

●

opacas o aclaradas

4. Preparación de muestras

Técnicas depreparación para luz transmitida
●

Las muestras lo suficientemente pequeñas como
para ser observadas enteras pueden también ser
observadas vivas, obteniéndose el contraste
mediante dispositivos ópticos tales como contraste
de
fases
o
contraste
interferencial
u,
ocasionalmente, por medio de tintes vivos
(tinciones no tóxicas que tienen afinidad por ciertos
componentes celulares).

4. Preparación demuestras

Técnicas de preparación para luz transmitida
●

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Sin embargo, la mayoría de los organismos, sus
órganos y tejidos, e incluso sus células, son
demasiado grandes para proporcionar información
de alta resolución con los microscopios ópticos
convencionales.
Por ello no pueden ser observados vivos sino que
hay que matarlos y entonces (generalmente) deben
ser deshidratados, incluidos, cortados,teñidos y
montados antes de su examen al microscopio.

4. Preparación de muestras

Técnicas de preparación para luz transmitida
Montajes temporales de muestras vivas enteras
●

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Las muestras que son organismos completos o
partes de organismos vivientes requieren un
tratamiento especial, tanto para mantenerlos vivos
durante la observación, como para asegurar que su
muerte no destruya información deinterés.
Las muestras examinadas al microscopio mientras
están vivas suelen ser pequeñas: organismos
completos como bacterias, protozoos y pequeños
animales y plantas, o partes discretas de
organismos como células en cultivo, células
sanguíneas, granos de polen, etc.

4. Preparación de muestras

Técnicas de preparación para luz transmitida
Montajes temporales de muestras vivas enteras
●Dependiendo de la duración de la observación y de
la naturaleza de la muestra, se debe prestar
atención a la provisión de suficiente oxígeno, al
mantenimiento de la concentración de otras
sustancias (por ejemplo sales y “alimento”), a la
eliminación del CO2 y otros residuos, al control de
la temperatura, a la provisión de luz apropiada, a la
eliminación
de
organismos
extraños
o
depredadores.

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