Abtencion adn

Extracción de ADN en Plantas
Método “Mini-Prep”
Alejandra Vázquez Lobo. 1996. “Filogenia de Hongos Endofitos del Genero Pinus L.: Implementación de Técnicas moleculares y ResultadosPreliminares”. Tesis de Licenciatura. Facultad de Ciencias, UNAM.

1. Moler 1gr de tejido con nitrógeno líquido
2. Moler aproximadamente 0.2 gr de tejido molido con 1,000l CTAB2X y recuperar todo en un tuboeppendorf de 1.5ml

3. Centrifugar 10,000g 8min 4ºC ---> eliminar sobrenadante
4. Resuspender con 600l CTAB 2X (agregar 60 ul Proteinasa K Recuperar 200l -250l desobrenadante en un tubo nuevo

8. Agregar 2/3 de vol. (aproximadamente 600l) de Isopropanol frío (–20ºC)
9. Reposar 2hrs. a –20ºC (el tiempo puede variar según la cantidad deimpuresas y la naturaleza de la muestra de 30 min. A 2 hrs)

10. Centrifugar 9,000g 5min 4ºC---> Eliminar sobrenadante
11. Agregar 1000l etanol 70% frío –20ºC ---> Reposar 5min temp. ambiente12. Centrifugar 7,000g 5min ---> Eliminar sobrenadante
13. Dejar secar hasta que la muestre quede seca.

Nota: La tesis de Alejandra Vazquez explica detalladamente el sentido de cada uno de losreactivos y procesos.















Eliminación de RNA
Alejandra Vazquez L.
Alejandra Vázquez Lobo. 1996. “Filogenia de Hongos Endofitos del Genero Pinus L.: Implementación deTécnicas moleculares y Resultados Preliminares”. Tesis de Licenciatura. Facultad de Ciencias, UNAM.
1. Agregar 2 μl RNAsa
2. Incubar a 37ºC 30min
3. Agregar 100μl Acetato de amonio 7.5M frío
4.Incubar 4ºC 15min
5. Centrifugar 10,000 rpm 10 min ---> Recuperar sobrenadante
6. Agregar Etanol 95% (600μl)
7. Centrifugar 8,500 rpm 5 min ---> Eliminar sobrenadante
8. 1000 μl Etanol70%
9. Centrifugar 6,000 rpm 4min ---> Eliminar sobrenadante
10. Secar
11. Resuspender

Nota: La tesis de Alejandra Vazquez explica detalladamente el sentido de cada uno de los reactivos y...