actividad de enzimas proteoliticas

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS PROTEOLITICAS. METODO DE KUNITZ
OBJETIVOS
a) Elaborar una curva estándar de actividad enzimática
b) Determinar la actividad proteolítica de la bromelaina,la papaína y otras proteasas

FUNDAMENTO
Los inhibidores de proteasas son proteínas o péptidos con la capacidad de unirse al sitio catalítico de la proteasa para atenuar o abatir la actividadhidrolitica de manera selectiva. Su utilidad abarca desde su participación en los mecanismos de defensa de plantas, la regulación de proteasas endógenas así como en procesos industriales, como modelos eningeniería de proteínas y como marcadores de diversidad vegetal.
Los inhibidores de las proteasas son factores anti nutritivos presentes en muchos ingredientes proteicos de origen vegetal que sepueden usar en la alimentación de peces, particularmente leguminosas. Su efecto depende de su origen y el tipo de enzima diana.
El inhibidor de la proteasa Kunitz, que es relativamente sensible al calory el ácido, y el más estable inhibidor de la proteasa Bowman-Birk. Una molécula del primero bloquea, bien una molécula de tripsina o de quimotripsina, mientras que el segundo inhibidor bloquea dosmoléculas de tripsina o quimotripsina al mismo tiempo.


RESULTADOS

Tubo
Concentración de tripsina
A 280
A corregida


Problema
Testigo

T1 y 1
0.04
0.239
0.067
0.172
T1 y 2
0.080.368
0.073
0.295
T1 y 3
0.12
0.456
0.068
0.388
T1 y 4
0.16
0.574
0.081
0.493
T1 y 5
0.2
0.622
0.067
0.555
Problemas
T1 y 1
Bromelaina 1:10
0.572
0.206
0.410
T1 y 2
Bromelaina1:20
0.531
0.162
0.325


Para obtener la siguiente grafica de actividad enzimática específica primero debemos dividir la pendiente de la grafica anterior entre 20

Este valor lo multiplicamospor cada valor de concentración de tripsina para formar el eje de las ordenadas de la siguiente grafica




Quedado como se muestra en la tabla
Tubo
Unidades tripticas
A corregida
1
0.00482...