Determinación De Enzimas Proteolíticas

INTRODUCCION:
Las enzimas son catalizadores (aumentan la rapidez) muy potentes y eficaces, químicamente son proteínas. Al igual que los catalizadores metálicos, sólo se requiere una masa pequeña para funcionar, la que se recupera indefinidamente. No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran suconsecución.
Las enzimas son grandes proteínas que aceleran las reacciones químicas. En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan mediante una o más cadenas poli peptídicas, que así aportan un pequeño grupo de aminoácidos para formar el sitio activo, o lugar donde se reconoce el sustrato, y donde se realiza la reacción. Una enzima y un sustrato no llegan a interaccionar si sus formas no encajan conexactitud. Algunos fragmentos de ARN también tienen capacidad de catalizar reacciones relacionadas con la replicación y maduración de los ácidos nucleicos, dichos fragmentos se denominan ribosomas.
Las enzimas proteolíticas y lipolíticas actúan sobre diversos substratos naturales y sintéticos y son principalmente utilizadas en la industria como detergentes, en tanto las amilasas, gelatinosas,caseínas y agarasas se emplean como aditivos en la industria alimentaria
OBJETIVOS:
Determinar la actividad enzimática de la tripsina en base a una curva de actividad enzimática.

Conocer la relación entre la actividad enzimática de la tripsina y su actividad específica para obtener las unidades específicas para la tripsina.


Comparar unidades específicas de tripsina de cada proteasa.INFORME:
CURVA DE AVTIVIDAD ENZIMATICA
Tubo Concentración de tripsina (mg/ml) A 280 Problemas A 280 Testigo A280 corregida
T1 Y 1 0.04 0.279 0.075 0.204
T2 Y 2 0.08 0.393 0.047 0.346
T3 Y 2 0.12 0.525 0.044 0.481
T4 Y 4 0.16 0.599 0.046 0.553
T5 Y 5 0.2 0.767 0.048 0.719
PROBLEMAS
TI Y I Bromelaína 1:10 0.706 0.236 0.47
TII Y II Bromelaína 1:20 0.26 0.136 0.124
TIII Y IIIPapaína 0.097 0.119 -0.022

A corregida= A problema – A testigo
A corregida= 0.279-0.075
A corregida=0.204

Y=3.0985x+0.0895
Donde m=3.0985
Calculo de las unidades tríptica UT por miligramo de tripsina
UT=m/(20 )
Entre 20 porque son 20 minutos de digestión
UT=3.0985/(20 )
UT=0.154625
CURVA DE ACTIVIDAD ENZIMATICA ESPECÍFICA
Tubo Unidades trípticas A 280
1 6.185x10-3 0.204
20.01237 0.346
3 0.018555 0.481
4 0.O2474 0.553
5 0.03092 0.719


UT para el tubo 1
UT=0.154625----------1 mg
X------0.04 mg
x=6.185x10-3

Ecuación de la recta
y = 1.4922x10^-3x + 0.0129
Ecuación empírica
A = 1.4922x10^-3UT + 0.0129
Para la UT de la Bromelaína 1:10
UT=(A-0.0129)/(1.4922x10^-3)

UT=(0.470-0.0129)/(1.4922x10^-3)
UT=306.32
41 ml – 25gpiña
0.1ml- x g piña
X=0.0609 gpiña
306.32 UT----0.0609gpiña
xUT------1gpiña
X=1.98x10-4 UT
Para la UT de la Bromelaína 1:20
UT=(A-0.0129)/(1.4922x10^-3)

UT=(0.124-0.0129)/(1.4922x10^-3)
UT=74.45
41 ml – 25gpiña
0.2ml- x g piña
X=0.1219g piña
74.45 UT----0.1219gpiña
xUT------1gpiña
X=1.68x10-3 UT

Para la UT de la papaína
UT=(A-0.0129)/(1.4922x10^-3)

UT=(-0.022-0.0129)/(1.4922x10^-3)
UT=-23.38
Se puededecir que UT=0 al ser un numero negativo y esto se puede decir que fue por un error al momento dela preparación de tubo.
Cuestionario
Defina actividad enzimática y actividad enzimática especifica
Actividad enzimática: Es la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1µmol de sustrato en un minuto de digestión; es decir q el número de unidades de enzima por miligramo de proteína o pormililitro de disolución.
Actividad enzimática específica: es la relación entre la cantidad de la enzima y la proteína

Escribe la clasificación de las proteasas en función de su mecanismo de acción y diga en que grupo se ubican las determinadas en la practica
i) Serina proteasas: estas proteasas tienen en común la característica de ser inhibidas por el disco propi fosforo fluriato (DFP) que...