actividad

INSTITUTO POLTÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA MICROBIANA





DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD DE SUCCINATO DESHIDROGENASA EN Escherichia coli.



INTEGRANTES:







PROFESORES:



6QM1
EQUIPO 1
SECCIÓN 1

RUBROS A EVALUAR
PUNTUACIÓN
CALIFICACIÓN
HIPÓTESIS Y DISEÑO EXPERIMENTAL
0.3 PUNTOS

OBJETIVOS
0.1 PUNTOSREGISTRO DE DATOS
0.3 PUNTOS

MANEJO DE DATOS
0.4 PUNTOS

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
0.5 PUNTOS

CONCLUSIONES
0.3 PUNTOS

BIBLIOGRAFÍA
0.1 PUNTO

TOTAL
2.0 PUNTOS














HIPOTESIS.

Si al emplear succinato como fuente de carbono en el desarrollo de   E.coli, se induce la síntesis de la succinato deshidrogenasa, mientras que la glucosa la reprime; entonces lamedición de la actividad de succinato deshidrogenasa en cultivos de E. coli desarrollados con succinato será mayor que en aquellos desarrollados con glucosa.
Si debido a que la glucosa es transportada al interior de la bacteria de manera más rápida que el succinato, entonces se obtendrá un mayor crecimiento de Eschericia coli al cultivarla con glucosa que con succinato.

Si la enzima succinatodeshidrogenasa es una enzima regulable, entonces su actividad se verá afectada mediante la fuente de carbono (glucosa o succinato) en que se desarrolle el microorganismo, y la fuente de carbono que se le adicione posterior a su crecimiento.


OBJETIVO GENERAL
Determinar bajo las condiciones, de succinato y glucosa, la enzima succinato deshidrogenasa, donde registrará mayor actividad fisiológica, asícomo determinar cuál es la mejor fuente de carbono para el crecimiento de Escherichia coli.
OBJETIVOS PARTICULARES
Determinar el crecimiento celular de Escherichia coli en cultivos de succinato y glucosa por medio de un método espectrofotométrico


Evaluar el efecto de la fuente de carbono sobre la actividad de la succinato deshidrogenasa en un intervalo de tiempo por métodoespectrofotométrico.



DESARROLLO EXPERIMENTAL
OBTENCIÓN DE LA SUSPENSIÓN CELULAR
Con una asada de un cultivo en medio inclinado de la cepa silvestre de Escherichia coli, se inocularon dos matraces Elernmeyer de 250 mL, los cuales contenían cada uno 50 mL de medio Sypher y Strauss, a uno de ellos se le adiciono glucosa 1.0% como fuente de carbono y al otro Succinato 0.5%; se incubaron a 37°C enagitación durante 12 horas.
Las células se cosecharon por centrifugación en condiciones de esterilidad y se lavaron dos veces con regulador de fosfatos estéril y, finalmente, se resuspendieron cada una en un volumen final de 10 mL del mismo regulador.
En cada una de las suspensiones anteriores, se inocularon una serie de 4 matraces, utilizando 1 mL por cada 50 mL de medio, de acuerdo a la siguiente:Para el matraz 1, contenía el inoculo de células crecidas en Succinato y Succinato 0.5% como fuente de Carbono adicionada.
En el matraz 2, contenía el inoculo de células crecidas en Succinato y Glucosa 1.0% como fuente de Carbono adicionada.
Para el matraz 1, contenía el inoculo de células crecidas en Glucosa y Succinato 0.5% como fuente de Carbono adicionada.
Para el matraz 1, contenía elinoculo de células crecidas en Glucosa y Glucosa 1.0% como fuente de Carbono adicionada.
Se trabajo en condiciones de esterilidad y se tomaron alícuotas de 4 mL de cada uno de los cultivos y se leyeron las absorbencias a 600 nm, desde el tiempo inicial de la incubación contra un medio de cultivo sin inoculo.
Los cultivos se inocularon a 37°C durante 5 horas y se volvió a leer la absorbencia, tiempofinal de la inubación.las células contenidas en los cultivos se ajustaron a 0.8 de absorbencia a 600 nm.




EFECTO DE LA FUENTE DE CARBONO SOBRE LA ACTIVIDAD DE SUCCINATO DESHIDROGENASA
La determinación de la actividad de Succinato deshidrogenasa se lleva acabo de la siguiente manera:
En una celda de espectrofotómetro, se colocaron los siguientes reactivos: 0.25 mL de 2,6-dinitrofenol...