adadad

PRACTICA 4
TÉCNICAS DE OBSERVACION Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
FITOPATÓGENAS
Las bacterias que afectan plantas están agrupadas en 38 géneros y
aproximadamente 200 especies, constantemente la taxonomía sufre cambios y la
cantidad de géneros y de especies varía. Los métodos para su detección en campo
y laboratorio permiten determinar en algunos casos especies tan solo por el
reconocimiento desíntomas o por asocio a un hospedante en particular. Las
bacterias fitopatógenas pueden ocasionar severas pérdidas cuando las condiciones
ambientales son favorables para su desarrollo y diseminación.
I.

OBJETIVOS



II.

Recrear algunas de las pruebas comúnmente usadas para caracterizar
bacterias fitopatógenas.
Que el estudiante aprenda a diferenciar al menos uno de los géneros debacterias que afectan plantas.

INSTRUCCIONES PRE-PRACTICA

1

Realizar investigación sobre las bacterias fitopatógenas, la taxonomía
actualizada, géneros de importancia económica, cultivos que afectan,
sintomatología, métodos y técnicas para su estudio en el laboratorio. Además
buscar información sobre Xanthomona hederae, Xanthomonas pelargonii y
Acidovorax citrulli

2

En parejascolectar hojas y frutas que presenten síntomas de Xanthomonas
hederae, Xanthomonas pelargonii y Acidovorax citrulli, (deben colectar al menos
uno de los tres especímenes), un chile pimiento rojo sano y en perfectas
condiciones, un marcador indeleble, un paquetito de palillos de dientes (este
último entregarlos un día antes de la practica al técnico de laboratorio)

AcidovoraxPectobacterium

Xanthomonas

Ralstonia

Laboratorio de e Introducción a la Fitopatología

Agrobacterium

Página 1

III.

AL INGRESAR AL LABORATORIO
 Presentar los materiales requeridos para la práctica (NO PODRA INGRESAR
A LA PRACTICA SI NO TRAE MATERIAL VEGETAL)
 Entregar el informe Post practica 3

IV .

MATERIAL Y EQUIPO
Microscopios, 40 Tubos con agua destilada estéril, portaobjetos, cubreobjetos,
reactivos para la tinción de Gram (cristal violeta, lugol, safranina, alcohol etílico
97% en gotero), mecheros de alcohol, 20 asas, 20 erlenmeyer con 50 cc de
alcohol al 70%, 20 cajas con agar, nutritivo para bacterias, 20 cajas con medio
YDC, 20 cajas con medio B de King 40 paquetes con 6 vidrios de reloj estériles,
20 agujas de disección, 20 mangos de bisturí, 20 hojasde bisturí selladas, 20
frascos con 50 cc de alcohol al 97%, 20 frascos con 50 cc de hipoclorito de
sodio al 0.05%, 5 rollos de papel toalla, 20 bolsas de nylon transparente de 5 lb.
20 paquetitos con dos hojas de papel mayordomo estéril envueltos en papel
aluminio, 20 paquetitos con cuatro palillos de dientes esterilizados.

V.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Las pruebas a efectuar son lassiguientes:
1.
2.
3.
4.

1.

Observación de síntomas y observación de flujo bacteriano
Tinción de Gram y observación de morfología de bacterias
Pre-aislamiento en tejido vivo técnica del Chile pimiento
Velocidad de crecimiento forma y coloración de las colonias en medios
de cultivo.

DETECCIÓN DE SÍNTOMAS BACTERIANOS Y OBSERVACION DE FLUJO
BACTERIANO
o Cada estudiante observara yestudiara minuciosamente las
características de los síntomas presentes, por simple observación y
con ayuda de un estereoscopio observe el halo bacteriano y la
pudrición blanda y cambios de coloración en las manchas foliares y
las frutas.
o Realice cortes de tejidos foliares en la zona plesionecrotica
procurando incorporar dentro del corte, tejido vascular, los cortes
deberán ser deaproximadamente medio mm de grosor e incluir
completamente o en lo que se pueda la lamina foliar a lo ancho y
largo, sino una porción delgada del parénquima esponjoso según sea
el caso
o Montar las porciones de tejido en una gota de formaldehido al 10%

Laboratorio de e Introducción a la Fitopatología

Página 2

o Observar al microscopio la forma en que las bacterias fluyen del tejido
vegetal....