Adn extraccion

Universidad de Santiago de Chile
Ingeniería civil química
Laboratorios

LABORATORIO IV
Extracción de ADN

Profesor encargado: Jeannette Vera A
INTRODUCCIÓN

En las células se encuentran dos variedades de ácidos nucleicos: el ácido ribonucleico (ARN) y el ácido desoxirribonucleico (ADN). En el ADN están codificados los genes, el material hereditario de las células, y contieneinstrucciones para la producción de todas las proteínas que el organismo necesita.
El ADN se puede extraer a partir de células de cualquier organismo vivo, desde bacterias a células humanas y también a partir de virus.
Uno de los principales factores a considerar cuando se extrae ADN genómico, es el tipo de organismo con el cual se va a trabajar y la cantidad de tejido del que se dispone.

Medianteelectroforesis en un gel de agarosa es posible separar ADN o una mezcla de moléculas de ADN. Para ello las moléculas de ADN que están inmersas en un gel se someten a la acción de un campo eléctrico. Dado que los fragmentos de ADN están cargados negativamente todos se mueven en la misma dirección hacia el ánodo, migrando más rápido los fragmentos más pequeños. Las moléculas así separadas se puedenvisualizar mediante tinción con bromuro de etidio (cuidado; el bromuro de etidio es altamente cancerígeno), un colorante que se intercala entre las bases nitrogenadas y emite fluorescencia cuando se irradia con luz ultravioleta

ANEXOS
Electroforesis
La electroforesis es una técnica analítica de separación de macromoléculas. La separación tiene lugar debido a la diferente movilidad que presentanlas macromoléculas cargadas cuando son sometidas a la influencia de un campo eléctrico como consecuencia de su relación carga/masa. Los ácidos nucleicos son macromoléculas cargadas negativamente, debido a la presencia de grupos fosfato en su estructura. La naturaleza del enlace fosfodiéster de las cadenas polinucleotídicas condiciona la carga de un ácido nucleico, que es aproximadamente igual alnúmero de grupos fosfato.
La electroforesis en geles de agarosa se realiza en cubetas apropiadas, generalmente horizontales, y requiere dos elementos indispensables: la fase móvil y la fase estacionaria. La fase móvil es el medio amortiguador o tampón que permite la movilidad de las moléculas cargadas hacia los electrodos correspondientes cuando se genera un campo eléctrico. La fase estacionaria osoporte, es un polímero de naturaleza gelatinosa con un tamaño de poro homogéneo que se haya sumergido y embebido en la fase móvil. El polímero utilizado para el análisis electroforético de ácidos nucleicos de gran tamaño (100pb-10kb) es la agarosa.
La migración de los fragmentos de ácidos nucleicos (ADN o ARN) en un gel de agarosa sometido a un campo eléctrico depende tanto del voltaje del campo,como del tamaño de poro del gel de agarosa. La separación efectiva de los fragmentos de ADN o ARN (resolución) depende tanto de la masa como de la carga de los distintos fragmentos, en realidad de la relación carga/masa. Transcurrida la electroforesis, la localización relativa de los fragmentos se determina mediante distintos métodos de detección. La tinción con bromuro de etidio, una sondafluorescente tras iluminación con luz UV, es un método generalizado de detección de fragmentos de ADN, ya que la sonda se intercala entre la doble hélice de ADN y emite luz.
[pic]

Espectrofotometría. Principios Básicos
En las reacciones, en las que el color formado es proporcional a la cantidad de sustancia se llaman reacciones colorimétricas.
Midiendo la intensidad de color se podría conocer laconcentración de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican técnicas fotométricas, empleando un aparato llamado colorímetro (si mide sólo un determinado color) o espectrofotómetro (si realiza una medida de todo el espectro de colores).
Su funcionamiento de basa en la ley de Beer-Lambert: la fracción de luz incidente que es absorbida por una solución es proporcional a la concentración de...