Aislamiento De Bacteriófago

Universidad de Puerto Rico en Aguadilla
Departamento de Ciencias Naturales

Biol. 4207 Lab. Virología
Lab #3 Aislamiento del Bacteriófago

Objetivo – Utilizar dosmétodos para aislar el bacteriófago de las placas preparadas en el laboratorio anterior.

I- Contar las placas de bacteriófagos que son visibles en la placa de agar.Estos son los que visualizaremos como puntos claros en el área opaca de la placa de agar.
II- Utilizarán 2 placas (las que poseen las diluciones de 10-6 y 10-7) paraextraer el bacteriófago utilizando Tryptone broth y centrifugación.
a. Tomar 5 ml de Tryptone broth y lavar la placa de 10-6 por 5 minutos en el “orbital shaker” atemperatura ambiente.
b. Sacar los 5 ml de Tryptone broth de la placa de 10-6 y transferirlos a la placa de 10-7 y lavar por 5 minutos en el “orbital shaker” atemperatura ambiente.
c. Sacar los 5 ml y colocarlos en un tubo de ensayo esterilizado.
d. Centrifugar por 20 minutos en la centrifugadora clínica.
e.Pasar el sobrenandante a un tubo de ensayo limpio y esterilizado.
f. Guardar a 4°C

III- Utilizar la placa con la dilución de 10-5 para extraer una placa delbacteriófago utilizando la punta de una micropipeta y centrifugarlo.
a. Sacar con una punta de una micropipeta una placa de un tamaño grande. OJO UNA SOLA PLACA.b. Colocar la placa en 5 ml de Tryptone broth y centrifugar por 20 minutos.
c. Pasar el sobrenadante a un tubo de ensayo limpio y esterilizado.
d.Guardar a 4°C.
e. En el sobrenadante se encuentra el bacteriófago en el pellet los residuos de bacteria muertas. El bacteriófago logró hacer lísis y matar la bacteria.