Aislamiento del virus de newcastle

1. Nombre de la técnica:

Diagnóstico de la enfermedad de Newcastle. Aislamiento del virus por inoculación en embriones de pollo

2. Objetivo
Detectar la presencia del virus de la enfermedad de Newcastle, en muestras de órganos e hisopos traquéales y cloacales de aves.

3. Campo de aplicación .
La prueba de aislamiento viral se utiliza para detectar la presencia del virus de laenfermedad de Newcastle ya sea por la exposición a virus de campo o por vacunación, en muestras de órganos e hisopos de aves

4. Definiciones
La enfermedad de Newcastle es una enfermedad viral causada por un paramixovirus que puede producir signos respiratorios, digestivos y/o nerviosos, además de grados diversos de severidad de lesiones en la mayoría de las aves de cualquier edad. En el serhumano, puede causar conjuntivitis

5. Responsabilidad.
Este procedimiento debe ser ejecutado por el jefe del laboratorio de virología y/o el auxiliar de laboratorio, bajo la supervisión del coordinador de diagnóstico.

Fecha de Edición Sustituye a Clave
28 / Feb / 02 Ninguno lcdpvianc

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6. Equipo einstrumentos necesarios.
Agitador magnético.
Balanza analítica.
Balanza granataria
Campana de seguridad tipo II
Centrifuga clínica.
Congelador –20ºC.
Cronómetro
Filtros 0.45(
Homogeinizador
Pipetas serológicas de 1,5 y 10ml.
Prefiltros

7. Materiales de laboratorio

Frascos de diferentes volúmenes: 40, 100, 200 y 250 ml.
Jeringas insulinicas 1 ml
Jeringas de plástico de 3, 5 y10 ml
Mechero
Morteros de porcelana
Pinzas de disección
Placas de vidrio, para prueba de hemoaglutinación.
Punzón
Recipientes de plástico
Recipientes de plástico para puntas sucias con cloro.
Resistol 850
Tijeras

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8. Reactivos ysoluciones

8.1 Preparación de la solución amortiguadora de fosfatos (PBS )
Agua Desionizada 1 litro
Cloruro de sodio (NaCl) 8.2 g
Cloruro de potasio (KCl) 0.2 g.
Fosfato de potasio (KH2 PO4) 0.2 g.
Fosfato de sodio (Na2HPO412H2O) 2.8 g

8.2. Solución de Alseaver (anticoagulante).
Dextrosa20.5 g
Citrato de sodio 8.0g
Acido cítrico 0.55g
Cloruro de sodio 4.2g
Agua destilada 1000 ml
Esterilizar en autoclave a 1000 °C, durante 15 minutos.

3. Suspensión de antibióticos:
PenicilinaG sódica, 10 000 U.I./ml .
Estreptomicina 10 mg /ml

9. Biológicos
• Antígeno de referencia de cepa lentogénica del virus de la enfermedad de Newcastle
• Embriones de pollo, spafas de 9 a 11 días de edad.
• Glóbulos rojos de ave al 2% lavados con PBS
• Suero control positivo ENC (spafas)
• Suero control negativo (spafas)
• Suero control positivo IA (spafas)Fecha de Edición Sustituye a Clave
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9.1 Preparación de la suspensión de glóbulos rojos de ave al 2% lavados con PBS

Colectar la sangre con una jeringa de plástico, previamente cargada con 5 ml de solución de Alseaver’s (volumen/volumen). Por lo tanto en la jeringa quedará unvolumen de 10ml. después de colectar la sangre.
Vertir los 10 ml. en un tubo de vidrio. Invertir el tubo varias veces para mezclar adecuadamente los eritrocitos.
Centrifugar la sangre a 800 gravedades durante 10 minutos.
Con una pipeta retirar la solución de PBS y la capa de células blancas.
Llenar nuevamente el tubo con PBS.
Repetir el ciclo de lavado y centrifugación dos veces más.
Con...