Aislamiento microorganismos

Unidad 5. Técnicas de aislamiento de microorganismos

Práctica 8. Técnicas de aislamiento de microorganismos.
Objetivos
• Explicar el fundamento de diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación

para el aislamiento de microorganismos con características específicas.
• Aplicar diferentes técnicas para el aislamiento de microorganismos. • Obtener y comprobar la pureza de loscultivos aislados • Aplicar una técnica de conservación de corto o mediano plazo a los cultivos puros

obtenidos.

Introducción
En todos los ambientes naturales habitan múltiples microorganismos de diversos tipos y actividad fisiológica. Para efectuar el estudio de un organismo particular es necesario separarlo de la población mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas deaislamiento que conduzcan a la obtención de un cultivo puro. De manera general los métodos de aislamiento incluyen: 1. Separación física de los microorganismos mediante: a) Diluciones seriadas y siembra por vertido en placa b) Siembra por agotamiento 2. Utilización de medios de cultivo selectivos y diferenciales. 3. Aprovechamiento de características particulares de los microorganismos, tales como laformación de esporas, el metabolismo anaerobio y/ o facultativo, la capacidad para utilizar sustratos poco comunes, etc. Para facilitar el proceso de aislamiento y obtener mejores resultados, frecuentemente se emplean combinaciones de las técnicas anteriores.

1ª parte Materiales
• Por equipo

2 mecheros 2 asas bacteriológicas 2 gradillas 1 microscopio 1 juego de colorantes de Gram
• Mediosde cultivo: 1 caja de Petri con agar Mac Conkey 1 caja de Petri con agar YPMD 1 con agar Sabouraud Rosa de Bengala más estreptomicina (ASRBS). 1 caja de Preti con MSA (Manitol Sal Agar)

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• Material que deben tener los alumnos: 1 tubo de 13x100 estéril • Microorganismos Muestra problema proporcionada por el profesor.

Metodología
a) Aislamiento enmedios selectivos y diferenciales 1. Etiquetar cada uno de los medios Agar Mac Conkey (McK), Agar YPMD, Agar Sabouraud Rosa de Bengala más estreptomicina y MSA. 2. Registrar las características de los medios antes de ser inoculados. 3. A partir de la muestra compleja inocular en cada uno de los medios selectivos y diferenciales. Seleccionar la técnica adecuada para obtener colonias aisladas. 4.Asegurar cada una de las cajas con maskin tape. 5. Incubar a 37ºC durante 24 horas las cajas con agar McK y MSA. 6. Incubar a 28ºC durante 48 horas las cajas con agar Sabouraud Rosa de Bengala con estreptomicina y YPMD. 7. Revisar e incubar durante otras 48 horas 28ºC. b) Caracterización microscópica 1. A partir de la muestra compleja realizar una tinción de Gram. 2. Observar al microscopio y describircada uno de los diferentes grupos de microorganismos encontrados. 3. Relacionar los grupos microbianos a los medios de cultivo selectivos y diferenciales.

Disposición de desechos
1. Esterilizar el tubo con la muestra compleja en autoclave.

2ª parte Materiales
• Por equipo 2 mecheros 1 microscopio 1 juego de colorantes de Gram • Medios de cultivo 1 caja de Petri con Agar BHI 1 caja dePetri con agar Eosina Azul de Metileno (EMB) 1 caja de Petri con Agar Sabouraud o PDA

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Metodología
a) Desarrollo colonial en los medios de cultivo enriquecidos, selectivos y diferenciales para bacterias. En las cajas de Petri con McK y MSA proceda a: 1. Comparar la diversidad de las colonias desarrolladas en las cajas inoculadas. 2. Esquematizar cada cajay registrar en una tabla los tipos diferentes de colonias bacterianas en cada uno de los medios de cultivo. 3. Realizar una tinción de Gram a cada tipo de colonia (en un mismo portaobjetos). Para realizar la tinción es muy importante tomar como máximo solo una tercera parte de la colonia, el resto de la colonia será empleada para el siguiente aislamiento. 4. Integrar los resultados en una...