Análisis Electroforético De Isoenzimas

ANÁLISIS ELECTROFORETICO DE ISOENZIMAS LDH
 
1-INTRODUCCIÓN:

 El término isoenzima fue acuñado por C.L. Markert y F. Moller in 1959 para describir múltiples enzimas con especificidad de sustrato igual (enzimas distintas que trabajan sobre un mismo sustrato) o muy similar, y que ocurren en el mismo organismo. Markert luego propuso modificar el término para que incluyera adjetivos comoalélico, no-alélico, multimérico, conformacional y conjugado. Estos adjetivos implican una definición más amplia del término isoenzima y por lo tanto ahora incluye variaciones genéticas y modificaciones fisiológicas de las estructuras proteicas.
La deshidrogenasa láctica (LDH) es una enzima que se encuentra en la sangre y es ideal para el análisis de isoenzimas por electroforesis. La enzima consiste decinco isoenzimas electroforéticamente separables identificadas como LDH-1, LDH-2, LDH-3, LDH-4 y LDH-5, en el orden de su razón de migración electroforética, con LDH-1 siendo la más rápida. Como estas enzimas están asociadas a fuentes en tejidos u órganos específicos, sus concentraciones relativas en suero pueden proveer información en la diferenciación de enfermedades como infarto de miocardio,necrosis del hígado, infarto pulmonar, distrofia muscular primaria, anemia perniciosa y cáncer. Ya hay disponibles en el mercado pruebas de diagnóstico para estas enfermedades que incluyen el análisis de LDH.
Las enzimas LDH son importantes indicadores de diferenciación celular. El análisis de la síntesis de péptidos para isoenzimas se usa como un análisis clásico de la actividad génicadiferencial, que nos permite detectar actividad en ciertos tejidos. LDH-1 consiste de cuatro cadenas de un péptido especie A, mientras que LDH-5 consiste cuatro cadenas de un péptido especie B. LDH-2 a 4 son permutaciones de ambas especies génicas combinadas en un tetrámero funcional. El que LDH-1 o LDH-5 se produzcan depende de la actividad del gen A o B respectivamente. Si ambos genes están activos a lavez, y la concentración de cada péptido es equimolar, LDH-3 (AABB) sería la forma dominante. El tetrámero LDH es una molécula autoensamblable que depende de la concentración relativa de sus componentes para su forma tetramérica. Por ello, la distribución de isoenzimas puede analizarse estadísticamente y determinar el grado al que los genes A y/o B están trabajando. Esto implica que nonecesariamente se verán los cinco tipos de isoenzimas a la vez, en la corrida de una muestra de suero. El número y concentración de isoenzimas presentes en la muestra dependerán de la actividad metabólica de los tejidos del individuo del que se toma la muestra y de las condiciones de salud que pueda presentar.
 
 

2. OBJETIVOS:

 1.     Aprender a manejar un gel de poliacrilamida y el proceso deelectroforesis.

2.     Determinar la presencia de enzimas (deshidrogenasa de lactato, LDH) en muestras de suero utilizando reacciones enzimáticas directamente sobre el gel.

3. MARCO TEÓRICO
Lactato deshidrogenasa
La lactato deshidrogenasa (EC 1.1.1.27) es una enzima catalizadora se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, pero su presencia es mayor en el corazón, hígado, riñones, músculos,glóbulos rojos, cerebro y pulmones.
Corresponde a la categoría de las oxidorreductasas, dado que cataliza una reacción redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación de NADH a NAD+. Dado que la enzima también puede catalizar la oxidación del hidroxibutirato, ocasionalmente es conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa (HBD).
Participa en el metabolismo energético anaerobio,reduciendo el piruvato (procedente de la glucólisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el sustrato limitante de la vía glucolítica.
Los vertebrados, en algunos tejidos o tipos celulares, obtienen la mayor parte de su energía del metabolismo anaerobio (toda en el caso de eritrocitos dado que carecen de mitocondrias).
|
Reacción

Reacción según la notación de Cleland...